ヘルペスウイルスDNAの分子系統解析を応用した出身地域の推定

使用疱疹病毒 DNA 的分子系统发育分析估计起源区域

• 批准号: 18790419
• 负责人: 茂谷 久子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790419/
• 关键词: ヒト単純ヘルペスウイルス1; HSV-1 DNA; 三叉神経節; 法医学; 身元不明死体; 司法解剖死体; PCR; 培養; 分子系統解析

法医学における身元不明死体において、死因究明とともに個人識別は重要な鑑定事項である。ウイルスのDNA多型と地域性との間に密接な関係があることから、我々はJCウイルスのゲノム型を身元不明死体の出身地域推定に応用し、現在ではヒト三叉神経節に潜伏する単純ヘルペスウイルス1(HSV-1)に着目している。司法解剖死体120例の左右三叉神経節より抽出したDNAを用いて、HSV-1 DNAの検出を行ったところ全検体の約半数から検出可能であり、分子系統解析においてはゲノム型と出身地域が完全に符号し、この方法による身元不明死体の出身地域推定は可能であることが示唆された。HSV-1 DNAは、ほとんどの検体において両側性に検出されたため、左右側におけるゲノム型の比較、同側における重複感染を検討することとし、司法解剖死体の三叉神経節に潜伏するHSV-1ウイルスの分離を試みた。司法解剖死体3例から左右側の三叉神経節6検体を採取し、検体の約半量についてVero細胞上で静置するEXPLANT法を行った。また、培養2日目の上清を採取し、ウイルスのDNA抽出を行った。さらに、検体の約半量においては、培養を行わずDNA抽出を行った。抽出したDNAについて、安定なRL2領域(147bp)及びVariableなV1領域(666bp)におけるPCR増幅を行った。3例の左右側6検体において、CPE判定は陰性であった。しかし、培養上清から抽出したDNAを用いたPCRの結果は、RL2領域では全て陽性、V1領域では半数において陽性であった。また、検体から直接抽出したDNAを用いたPCRの結果は、RL2領域では1検体を除いて全て陽性、V1領域では2検体において陽性であった。以上の結果から、死後経過時間の経過しているヒト三叉神経節ではHSV-1分離が難しいと推測される。しかし、培養上清からのDNAを用いたPCRの結果を考慮すると、三叉神経節からのHSV-1のDNA断片の遊離、もしくは培養液中に再活性化されたHSV-1の放出などが推測される。従って、今後は検体数を増やして検討していく予定である。

Forensic science における unidentified dead body にお て て, cause of death とと に に personal identification な important な identification matters である. ウ イ ル ス の DNA polymorphism と regional と の に between contact な masato is が あ る こ と か ら, I 々 は JC ウ イ ル ス の ゲ ノ body of unknown type ム を body yuan の presumption from regional に 応 し, now で は ヒ ト trigeminal god 経 section に latent す る 単 pure ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス 1 (HSV - 1) に し て い る. In 120 cases of judicial autopsy, the left and right trigeminal Shinto segments of the necrotic body were よ よ, and the たDNA of the necrotic body was extracted を and used with て て and HSV-1 DNA の 検 を row っ た と こ ろ 検 body の about half of all か ら 検 makes possible で あ り, molecular system analytic に お い て は ゲ ノ ム type と from regional が に symbols し, completely こ の way に よ る body yuan body of unknown の presumption from regional は may で あ る こ と が in stopping さ れ た. DNA は, HSV - 1 ほ と ん ど の 検 body に お い て struck laterality に 検 out さ れ た た め, left and right side に お け る ゲ ノ ム の comparison, ipsilateral に お け る superinfection を beg す 検 る こ と と し, judicial body of anatomical の trigeminal god 経 section に latent す る HSV - 1 ウ イ ル ス の separation を try み た. Judicial body of anatomy in 3 か ら left-right side の trigeminal section 6 god 経 検 body を take し, 検 body の about half quantity に つ い て で let stand on Vero cell す る EXPLANT method line を っ た. Youdaoplaceholder0, after 2 days of culture, the supernatant of <s:1> was を. <s:1> and ウ ス ス ス DNA was extracted from を rows った. Youdaoplaceholder0, 検 of the body <s:1> about half the amount of にお て て った, culture を rows of わずDNA, extract を rows of った. DNA extraction し た に つ い て, stable な RL2 field (147 bp) and び Variable な V1 areas (666 bp) に お け る line of PCR raised を っ た. In 3 cases, 6検 bodies on the left and right sides of the <s:1> were にお 検 て て and CPE were determined to be <s:1> negative であった. し か し, culture supernatant か ら spare し た を DNA with い た PCR results の は, RL2 で は て all positive, V1 areas で は half に お い て positive で あ っ た. ま た, 検 か ら direct pull し た を DNA with い た PCR results の は, RL2 で は except 検 body を い て て all positive, V1 areas で は 2 検 body に お い て positive で あ っ た. The above <s:1> result で ら, the time passed after death, the passing of て て るヒト, the るヒト of the trident Shinto festival で, the separation of HSV-1 が is difficult, と と speculation される. し か し, culture supernatant か ら の を DNA with い た PCR results の を consider す る と, trigeminal god 経 か ら の HSV - 1 の DNA fragment の free, も し く は medium, に again activeness さ れ の た HSV - 1 release な ど が speculation さ れ る. Youdaoplaceholder0, in the future, the number of を 検 will increase や て検 て検 and <s:1> て く く will be determined である.

项目成果

Detection of Herpes Simplex Virus Type 1 DNA from Bilateral Human Trigeminal Ganglia and Optic Nerves by Polymerase Chain Reaction.

通过聚合酶链式反应检测人双侧三叉神经节和视神经中的 1 型单纯疱疹病毒 DNA。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Medical Virology 78
• 作者: Motani H;Sakurada K;Ikegaya H;Akutsu T;Hayakawa M;Sato Y;Yajima D;Sato K;Kobayashi K;Iwase H
• 通讯作者: Iwase H

司法解剖死体のヒト三叉神経節における潜伏HSV-1分離の試み

尝试从法医尸体中分离人类三叉神经节中的潜伏 HSV-1

• 发表时间: 2007
• 作者: 茂谷久子;門馬祐子;岩瀬博太郎
• 通讯作者: 岩瀬博太郎