HCV増殖を抑制するインターフェロン誘導遺伝子群の探索及び機能解析

干扰素诱导抑制HCV增殖基因的搜索及功能分析

• 批准号: 18790447
• 负责人: 井津井 康浩
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790447/
• 关键词: HCVレプリコン; インターフェロン誘導遺伝子; GBP-1; インターフェロン; GBP1

本研究において、HCVの自律増殖系であるHCVレプリコンシステムを用いて、発現スクリーニングによるウイルス増殖制御に直接関与するインターフェロン誘導遺伝子(ISG); GBP-1, IFI-27, IFI-6-16のウイルス増殖抑制機構の解祈を進めることを目的とした。(1) ISGのHCV-Internal ribosomal entry site (IRES)依存性翻訳活性への影響:HCV-IRES-IuciferaseプラスミドとISG発現プラスミドをHuh7細胞へ導入し、luciferase assayを行ったところ,GBP-1,IFI-6-16,IFI-27はいずれもHCV-IRES依存性の翻訳活性に影響を与えなかった。(2) ISGのプロモーター活性への影響:interferon-stimulated response element (ISRE)、activator protein (AP1)およびnuclear factor-kappa B (NF-kappa B)の下流にfirefly luciferaseを結合したレポータープラスミドを作成し、ISG発現プラスミドとともに遺伝子導入し、luciferase assayを解析したところ,ISGはISRE, AP-1, NF-kappa Bいずれの転写活性に影響を与えなかった。(3) shRNAを用いたISGノックダウンによる影響:抗ウイルス作用を有するISG (GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)を標的とするshRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドを作成した。shRNA発現プラスミドをHuh7/Rep-Feo細胞へtransfectionし、HCVレプリコンの増殖をluciferase assayで解析した。GBP-1, IFI-6-16, IFI-27を,おのおのshRNAでノックダウンさせるとレプリコン増殖が有意に上昇した(GBP-1; 46.2±10.6%, IFI-6-16; 34.0±10.3%,IFI-27; 48.1±28.1%)。以上の結果から、申請者が同定したISG (GBP-1、IFI-6-16、IFI-27)がHCV-IRES依存性翻訳活性や、ISRE、AP-1、NF-kappa Bなどの転写活性に影響を与えないことから、これらのISGが直接的にHCV増殖を抑制していると示唆された。さらにsiRNAにてISG発現抑制するとHCVレプリコン増殖が上昇することから、ISGがHCV増殖抑制に寄与していると考えられた。HCV増殖を抑制する特定のISGを特化した治療が新しいHCV治療となりうる。

In this study, HCV auto-propagation system was used to develop HCV auto-propagation system, which was directly related to the development of HCV auto-propagation system and the development of HCV auto-propagation inhibition mechanism. (1)Effects of HCV-Internal ribosomal entry site (IRES) on ISG dependent translational activity:HCV-IRES-Iuciferase expression and ISG development were detected in Huh7 cells, and the luciferase assay was performed in Huh7 cells. GBP-1,IFI-6-16,IFI-27 showed effects on HCV-IRES dependent translational activity. (2)The effects of ISG on the activity of ISG are: the combination of interferon-stimulated response element (ISRE), activator protein (AP1) and nuclear factor-kappa B (NF-kappa B) downstream firefly luciferase; the introduction of ISG; the analysis of luciferase assay; the effects of ISG on the activity of ISRE, AP-1, NF-kappa B. (3)ISG (GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) targets were identified and shRNA(short hairpin RNA) targets were created. shRNA expression profile analysis of Huh7/Rep-Feo cell transfection, HCV replication and luciferase assay The proliferation of GBP-1, IFI-6-16, IFI-27, and Ono shRNA has increased significantly (GBP-1; 46.2± 10.6%, IFI-6-16; 34.0± 10.3%, IFI-27; 48.1±28.1%). The above results show that ISG (GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) has the same effect on HCV-IRES-dependent replication activity, ISRE, AP-1, NF-kappa B, and direct inhibition of HCV proliferation. The expression of ISG was inhibited by siRNA, and the proliferation of HCV was increased. Specific ISG treatments for HCV replication inhibition are new to HCV treatment.

项目成果

Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor 3

• DOI: 10.1007/s00535-006-1842-x
• 发表时间: 2006-08
• 期刊: Journal of Gastroenterology
• 影响因子: 6.3
• 作者: T. Yamashiro;N. Sakamoto;M. Kurosaki;N. Kanazawa;Y. Tanabe;M. Nakagawa;Cheng-Hsin Chen;Yasuhiro Itsui-Ya

Divergent activities of interferon-alpha subtypes against intracellular hepatitis C virus replication

• DOI: 10.1016/j.hepres.2005.10.005
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: HEPATOLOGY RESEARCH
• 影响因子: 4.2
• 作者: Koyama, T;Sakamoto, N;Watanabe, M
• 通讯作者: Watanabe, M

C型肝炎ウイルスの増殖を制御するインターフェロン誘導遺伝子の探索と機能解析

干扰素诱导的控制丙型肝炎病毒增殖的基因的搜索和功能分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Yamashiro T;Itsui Y;et al.;井津井康浩
• 通讯作者: 井津井康浩

Development of plaque assays for hepatitis C virus and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity

开发丙型肝炎病毒噬斑测定法并分离具有增强细胞致病性和复制能力的突变体

• 发表时间: 2008
• 期刊: Virology 371
• 作者: Yuko Sekine-Osajima;Naoya Sakamoto;Mina Nakagawa
• 通讯作者: Mina Nakagawa

HCV nonstructural proteins responsible for suppression of RIG-I/Cardif-induced interferon response

HCV 非结构蛋白负责抑制 RIG-I/Cardif 诱导的干扰素反应

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of General Virology 88
• 作者: Tasaka M;Sakamoto N;Itakura Y;Itsui Y
• 通讯作者: Itsui Y