HCV増殖を抑制するインターフェロン誘導遺伝子群の探索及び機能解析

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本研究において、HCVの自律増殖系であるHCVレプリコンシステムを用いて、発現スクリーニングによるウイルス増殖制御に直接関与するインターフェロン誘導遺伝子(ISG); GBP-1, IFI-27, IFI-6-16のウイルス増殖抑制機構の解祈を進めることを目的とした。(1) ISGのHCV-Internal ribosomal entry site (IRES)依存性翻訳活性への影響:HCV-IRES-IuciferaseプラスミドとISG発現プラスミドをHuh7細胞へ導入し、luciferase assayを行ったところ,GBP-1,IFI-6-16,IFI-27はいずれもHCV-IRES依存性の翻訳活性に影響を与えなかった。(2) ISGのプロモーター活性への影響:interferon-stimulated response element (ISRE)、activator protein (AP1)およびnuclear factor-kappa B (NF-kappa B)の下流にfirefly luciferaseを結合したレポータープラスミドを作成し、ISG発現プラスミドとともに遺伝子導入し、luciferase assayを解析したところ,ISGはISRE, AP-1, NF-kappa Bいずれの転写活性に影響を与えなかった。(3) shRNAを用いたISGノックダウンによる影響:抗ウイルス作用を有するISG (GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)を標的とするshRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドを作成した。shRNA発現プラスミドをHuh7/Rep-Feo細胞へtransfectionし、HCVレプリコンの増殖をluciferase assayで解析した。GBP-1, IFI-6-16, IFI-27を,おのおのshRNAでノックダウンさせるとレプリコン増殖が有意に上昇した(GBP-1; 46.2±10.6%, IFI-6-16; 34.0±10.3%,IFI-27; 48.1±28.1%)。以上の結果から、申請者が同定したISG (GBP-1、IFI-6-16、IFI-27)がHCV-IRES依存性翻訳活性や、ISRE、AP-1、NF-kappa Bなどの転写活性に影響を与えないことから、これらのISGが直接的にHCV増殖を抑制していると示唆された。さらにsiRNAにてISG発現抑制するとHCVレプリコン増殖が上昇することから、ISGがHCV増殖抑制に寄与していると考えられた。HCV増殖を抑制する特定のISGを特化した治療が新しいHCV治療となりうる。