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C型肝炎ウイルスを制御するインターフェロン誘導遺伝子の分子機構と機能修飾の解析

干扰素诱导控制丙型肝炎病毒基因的分子机制及功能修饰分析

基本信息

批准号：
20790486
负责人：
井津井康浩
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790486/
关键词：
C型肝炎ウイルスインターフェロン誘導遺伝子 GBP-1

项目摘要

本研究において、C型肝炎ウイルス(HCV)増殖を制御するインターフェロン誘導遺伝子(ISG)(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)の強制発現系を用い、独自に開発したC型肝炎ウイルス(HCV)レプリコン増殖細胞及びGenotype 2a. JFH1株由来HCV感染培養系を用いて, 蛋白翻訳、HCVゲノム複製、ウイルス粒子形成の各ステップに対する影響を詳細に解析することを目的とした。(1) genotype2aJFH株由来のHCVレプリコン増殖細胞にISG発現プラスミドベクター(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)を遺伝子導入したところ、レプリコン増殖は有意に抑制された(GBP-1 ; 42.2±12.3%, IFI-6-16 ; 38.1±7.0%, IFI-27 ; 57.1±13.2%(2) HCVレプリコンと同様にHCV感染培養細胞にISG発現プラスミドベクターを遺伝子導入し, 培養上清中のHCVコア抗原を測定したところ、ISG発現により、培養上清中のHCVコア抗原量は抑制された。さらにHCV感染細胞中からRNAを抽出し, RT-PCRを行い, HCVコア抗原遺伝子の定量したところ、ISG発現により、細胞内のHCV-RNA量は有意に抑制された(GBP-1 ; 38.2±1.39%, IFI-6-16 ; 54.6±2,93%, IFI-27 ; 50.7±2.81%)。(3) shRNAを用いたISGノックダウンによる影響 : 抗ウイルス作用を有するISG(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)を標的とするshRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドベクターを作成した。shRNA発現プラスミドベクターをHCV感染培養細胞へ遺伝子導入し、培養細胞中のHCVコア抗原量を測定したところ、培養上清中のHCVコア抗原量は増加した。さらにHCV感染細胞中からINAを抽出して、RT-PCRを行い、感染細胞内のHCV-RNAを定量したところ、shRNAにより、HCV-RNAは有意に増加した(shRNA-GBP-1 ; 161.1±1.95%, shRNA-6-16 ; 155.7±18.6%, shRNA-IFI-27 ; 114.6±7.13%)。以上の結果から、申請者が同定したISG(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27)は、HCV感染細胞内で、HCV増殖に対して直接的に作用し、HCV増殖を抑制していることが示唆された。HCV増殖を抑制する特定のISGを特化した治療が新しいHCV治療となりうる。

In this study, stress response lines (ISG)(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) were used in the development of HCV cells and Genotype 2a. JFH1 strain was isolated from HCV infected culture system, and the effects of protein inversion, HCV replication and HCV particle formation were analyzed in detail. (1)Genotype2aJFH Strain Originated HCV Genotype2aJFH Strain Originated HCV Genotype 2aJFH Genotype2aJFH Strain Originated HCV Genotype2aJFH Genotype 2aJFH Genotype 2a (GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) Gene introduction, gene propagation and intentional inhibition (GBP-1 ; 42.2±12.3%, IFI-6-16 ; 38.1±7.0%, IFI-27 ; 57.1±13.2%(2) HCV-positive cells and ISG positive cells were detected in culture supernatant after ISG positive cells were introduced into culture supernatant. During RT-PCR, HCV RNA was extracted from HCV-infected cells, and the amount of HCV RNA in cells was intentionally suppressed (GBP-1 ; 38.2± 1.39%, IFI-6-16 ; 54.6± 2,93%, IFI-27 ; 50.7±2.81%). (3)ISG(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) targets were identified and shRNA(short hairpin RNA) was produced. shRNA expression was detected in HCV infected culture cells, and the amount of HCV antigen in culture cells was measured. In addition, RNA was extracted from HCV-infected cells, RT-PCR was performed, HCV-RNA was quantified in infected cells, shRNA was detected, and HCV-RNA was increased intentionally (shRNA-GBP-1 ; 161.1± 1.95%, shRNA-6-16 ; 155.7± 18.6%, shRNA-IFI-27 ; 114.6±7.13%). The results showed that ISG(GBP-1, IFI-6-16, IFI-27) had a direct effect on HCV proliferation in HCV infected cells and inhibited HCV proliferation. Specific ISG treatments for HCV replication inhibition are new to HCV treatment.