肺癌細胞株のEGFRリン酸化経路に対するsiRNAと分子標的薬の併用効果の検討

[目的]肺腺癌細胞株におけるgefitinibへのsiRNAおよびEGFR下流分子阻害薬の併用効果を検討する。[方法]3種類の肺腺癌細胞株(H1650:gefitinib感受性EGFR遺伝子変異あり、H1975:gefitinib耐性EGFR遺伝子変異あり、H2347:野生型EGFR遺伝子あり)を対象とした。EGFR発現抑制siRNAベクター構築を試みた。また、二本鎖siRNAによる細胞増殖抑制効果について検討を行った。一方で、AKT、ERK、STAT3各々に対する阻害薬とgefitinibとの併用効果について、細胞増殖抑制効果・リン酸化抑制効果・細胞周期抑制効果から評価した。相加相乗効果はCombination Index(CI)の値から判定した。[結果]siRNAベクターにて、H1975のEGFRの発現抑制が認められた。また、H1650/H1975/H2347いずれの細胞においても、二本鎖siRNA濃度が50nMの際に細胞増殖抑制効果が最も高かった。gefitinibと下流分子阻害薬の併用にて、H1650では、AKT・ERK阻害薬併用で(CI<0.8)、H1975では、AKT/ERK/STAT3阻害薬併用で相乗効果が得られた(CI<0.5)。H2347では高い相乗効果は得られなかった(0.8<CI<1.5)。これらの相乗効果は各下流分子のリン酸化抑制によることが示された。また、gefitinibへの阻害剤併用によって、単剤に比して高頻度の細胞周期停止が確認された。[結論]EGFRを標的としたsiRNAによりEGFRの発現抑制および、細胞増殖抑制効果が得られた。gefitinib耐性EGFR遺伝子変異を有する肺腺癌細胞株に対して、gefitinibに加えEGFR下流分子阻害薬併用が有用であり、下流分子のリン酸化阻害および細胞周期停止がその機序であることが示された。

[目的]肺腺癌細胞株におけるgefitinibへのsiRNAおよびEGFR下流分子阻害薬の併用効果を検討する。[方法]3種類の肺腺癌細胞株(H1650:gefitinib感受性EGFR遺伝子変異あり、H1975:gefitinib耐性EGFR遺伝子変異あり、H2347:野生型EGFR遺伝子あり)を対象とした。EGFR発現抑制siRNAベクター構築を試みた。また、二本鎖siRNAによる細胞増殖抑制効果について検討を行った。一方で、AKT、ERK、STAT3各々に対する阻害薬とgefitinibとの併用効果について、細胞増殖抑制効果・リン酸化抑制効果・細胞周期抑制効果から評価した。相加相乗効果はCombination Index(CI)の値から判定した。[結果]siRNAベクターにて、H1975のEGFRの発現抑制が認められた。また、H1650/H1975/H2347いずれの細胞においても、二本鎖siRNA濃度が50nMの際に細胞増殖抑制効果が最も高かった。gefitinibと下流分子阻害薬の併用にて、H1650では、AKT・ERK阻害薬併用で(CI<0.8)、H1975では、AKT/ERK/STAT3阻害薬併用で相乗効果が得られた(CI<0.5)。H2347では高い相乗効果は得られなかった(0.8<CI<1.5)。これらの相乗効果は各下流分子のリン酸化抑制によることが示された。また、gefitinibへの阻害剤併用によって、単剤に比して高頻度の細胞周期停止が確認された。[結論]EGFRを標的としたsiRNAによりEGFRの発現抑制および、細胞増殖抑制効果が得られた。gefitinib耐性EGFR遺伝子変異を有する肺腺癌細胞株に対して、gefitinibに加えEGFR下流分子阻害薬併用が有用であり、下流分子のリン酸化阻害および細胞周期停止がその機序であることが示された。