肺癌細胞株のEGFRリン酸化経路に対するsiRNAと分子標的薬の併用効果の検討

siRNA与分子靶向药物联合对肺癌细胞系EGFR磷酸化途径的影响研究

• 批准号: 18790535
• 负责人: 北川 洋
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790535/
• 关键词: 肺癌; 腺癌; 上皮成長因子受容体; siRNA; AKT; MAPK; STAT3; リン酸化; AK

[目的]肺腺癌細胞株におけるgefitinibへのsiRNAおよびEGFR下流分子阻害薬の併用効果を検討する。[方法]3種類の肺腺癌細胞株(H1650:gefitinib感受性EGFR遺伝子変異あり、H1975:gefitinib耐性EGFR遺伝子変異あり、H2347:野生型EGFR遺伝子あり)を対象とした。EGFR発現抑制siRNAベクター構築を試みた。また、二本鎖siRNAによる細胞増殖抑制効果について検討を行った。一方で、AKT、ERK、STAT3各々に対する阻害薬とgefitinibとの併用効果について、細胞増殖抑制効果・リン酸化抑制効果・細胞周期抑制効果から評価した。相加相乗効果はCombination Index(CI)の値から判定した。[結果]siRNAベクターにて、H1975のEGFRの発現抑制が認められた。また、H1650/H1975/H2347いずれの細胞においても、二本鎖siRNA濃度が50nMの際に細胞増殖抑制効果が最も高かった。gefitinibと下流分子阻害薬の併用にて、H1650では、AKT・ERK阻害薬併用で(CI<0.8)、H1975では、AKT/ERK/STAT3阻害薬併用で相乗効果が得られた(CI<0.5)。H2347では高い相乗効果は得られなかった(0.8<CI<1.5)。これらの相乗効果は各下流分子のリン酸化抑制によることが示された。また、gefitinibへの阻害剤併用によって、単剤に比して高頻度の細胞周期停止が確認された。[結論]EGFRを標的としたsiRNAによりEGFRの発現抑制および、細胞増殖抑制効果が得られた。gefitinib耐性EGFR遺伝子変異を有する肺腺癌細胞株に対して、gefitinibに加えEGFR下流分子阻害薬併用が有用であり、下流分子のリン酸化阻害および細胞周期停止がその機序であることが示された。

[Objective] To investigate the effect of combination of gefitinib siRNA and EGFR downstream inhibitors on lung adenocarcinoma cell lines. [Methods] Three types of lung adenocarcinoma cell lines (H1650: gefitinib-sensitive EGFR gene variant, H1975: gefitinib-resistant EGFR gene variant, H2347: wild-type EGFR gene variant) were identified. EGFR gene expression inhibition siRNA construct Cell proliferation inhibition by siRNA and siRNA The effects of combination of gefitinib, AKT, ERK and STAT3 on cell proliferation inhibition, acidification inhibition and cell cycle inhibition were evaluated. The sum phase is determined by the Combination Index(CI). [Results] Inhibition of EGFR expression by siRNA and H1975 was recognized. H1650/H1975/H2347 was the most effective inhibitor of cell proliferation when the siRNA concentration was 50nM. gefitinib combined with downstream molecular inhibitors, H1650 combined with AKT and ERK inhibitors (CI<0.8), H1975 combined with AKT/ERK/STAT3 inhibitors (CI<0.5). H2347 (0.8<CI<1.5). The effect of this is that the downstream molecules are acidified. The combination of gefitinib and its inhibitors was identified as a relatively high frequency of cell cycle arrest. [Conclusion]EGFR targeting siRNA can inhibit EGFR expression and cell proliferation. gefitinib resistance EGFR gene variants exist in lung adenocarcinoma cell lines, and gefitinib is useful in combination with EGFR down-stream molecular inhibitors, and down-stream molecular inhibitors are useful in determining the mechanism of cell cycle arrest.

项目成果

A second-generation profiling system for quantitative methylation analysis of multiple gene promoters : application to lung cancer.

用于多基因启动子定量甲基化分析的第二代分析系统：在肺癌中的应用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Oncogene 26
• 作者: Sano A;Kage H;Sugimoto K;Kitagawa H;Aki N;Goto A;Fukuyama M;Nakajima J;Takamoto S;Nagase T;Yatomi Y;Ohishi N;Takai D
• 通讯作者: Takai D

The induction of H3K9 methylation by PIWIL4 at the p16Ink4a locus

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2007.05.136
• 发表时间: 2007-08-03
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Sugimoto, Keiki;Kage, Hidenori;Takai, Daiya
• 通讯作者: Takai, Daiya

Synergism for Akt, ERK, STAT3 inhibitor on gefitinib in lung adenocarcinoma.

Akt、ERK、STAT3 抑制剂对吉非替尼在肺腺癌中的协同作用。

• 发表时间: 2007
• 作者: Mikami K;Suzuki M;KitagawaH;et. al.;佐野 厚;Kitagawa H.
• 通讯作者: Kitagawa H.