接着分子による骨髄腫細胞の増殖、分化制御機構の解明

阐明粘附分子控制骨髓瘤细胞增殖和分化的机制

• 批准号: 18790652
• 负责人: 安見 正人
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790652/
• 关键词: 骨髄腫; N-Cadherin; 薬剤耐性; 多発性骨髄腫; 接着因子; 骨髄微小環境; N-cadherin

骨髄腫培養細胞株を用いてRT-PCR法およびウエスタンブロット法によりN-Cadherinの発現を確認した。12細胞株中8細胞株にてN-Cadherinの発現を認めた。N-Cadherinと細胞内において複合体を形成するα-Catenin,β-CateninもN-Cadherin陽性培養細胞株すべてに発現を認めた。抗N-Cadhrin抗体および抗β-Catenin抗体を用いた免疫沈降法にてα-Catenin,β-CateninおよびN-Cadhrin,α-Cateninはそれぞれ共免沈された。臨床検体を用いて抗light chain抗体および抗N-Cadherin抗体による免疫染色により骨髄腫細胞でのN-Cadherinの発現を確認した。9症例すべてにおいてN-Cadherinの発現を認めた。骨髄腫培養細胞株を用いN-Cadherin細胞外領域キメラタンパク質(N-Cadherin-Fc)をコートしたディシュ上での接着実験を行った。骨髄腫培養細胞株とN-Cadherin-Fcとの接着は時間およびN-Cadherin-Fc量依存性に増加し、またこの接着はN-Cadherin細胞外領域を認識する阻害抗体、およびEGTA存在下にて阻害された。これらの結果から骨髄腫細胞には機能的なN-Cadherin-Catenin複合体が発現していることが示唆された。次にN-Cadherinの細胞接着による薬剤耐性を検討したMelphalall(30μM),Doxorubicine(1μM)存在下にて48時間培養後、PI染色を行った。浮遊培養ではそれぞれ70%,40%の細胞がPI陽性であったのに対し、N-Cadherin-Fcをコートしたディシュ上で24時間培養後薬剤を加えた群ではPI陽性細胞はそれぞれ5%,10%と低下を認めた。以上の結果からN-Cadherinによる細胞接着が骨髄腫の薬剤耐性に関与し耐性克服への分子標的となる可能性が示唆された。

The development of N-Cadherin was confirmed by RT-PCR in cultured osteoma cell lines. 8 out of 12 cell lines were identified for N-Cadherin expression. N-Cadherin and intracellular complex formation, α-Catenin,β-Catenin and N-Cadherin positive cell lines Anti-N-Cadrin antibodies and anti-β-Catenin antibodies are used in immunoassays to detect α-Catenin,β-Catenin and N-Cadrin,α-Catenin. The presence of N-Cadherin in osteoma cells was confirmed by immunostaining with anti-light chain antibodies and anti-N-Cadherin antibodies in clinical specimens. 9 cases of N-Cadherin Bone marrow cell lines were cultured with N-Cadherin in the extracellular domain. N-Cadherin-Fc and N-Cadherin-Fc quantity dependence of osteoma cell lines increased, and N-Cadherin extracellular domain recognition of osteoma cell lines was inhibited in the presence of EGTA. The N-Cadherin-Catenin complex was found in osteoma cells. N-Cadherin cells were then incubated for 48 hours in the presence of Melphalall(30μM) and Doxorubicine(1μM), followed by PI staining. 70% and 40% of the cells were PI positive, and 5% and 10% of the cells were PI positive after 24 hours of culture. The above results show that N-Cadherin cells are subsequently resistant to osteoma and that tolerance overcomes the molecular targets of osteoma.