siRNAを用いた膵臓癌でのS100A4遺伝子発現抑制と転移能に対する影響の検討

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膵臓癌の細胞株を用いた転移関連因子S100A4と細胞接着因子であるE-cadherinの発現,siRNAによる発現の抑制効果と転移関連因子に対する影響を確認した.(方法)膵臓癌細胞株PANC-1,MIAPaCa-2,CAPAN-2,BxPC-3を用いてA. real time PCRによりS100A4とE-cadherinの発現を比較検討した.B. S100A4に対するsiRNAを用いて内在性S100A4発現の抑制効果をreal time PCRで確認した.C. S100A4の発現抑制効果によるMMP-2,9に対する影響をzymographyによって検討した.D. S100A4発現抑制後の浸潤能をinvasion assayにより評価した.(結果)S100A4の発現はβ-actin比でPANC-1(0.95),MIAPaCa-2(0.82),CAPAN-2(0.13),BxPC-3(0.11)で,一方,E-cadherinはPANC-1(2.1),MIAPaCa-2(0.3),CAPAN-2(31.2),BxPC-3(17.5)となり臨床材料の結果と同様こS100A4とE-cadherinの発現量には,強い負の相関関係が認められた(P<0.05).内在性S100A4発現の最も高いPANC-1を用してS100A4siRNAの1-30nMを設定して最適効果濃度を検討し10nMが最適と考えられた.PANC-1に対するsiRNAのトランスフェション効果はコントロールに比べて最大で32%のS100A4発現抑制が得られた.それとともにE-cadherinの発現は12%上昇していた.S100A4発現抑制後のMMP-2には変化を認めなかったが,MMP-9では酵素活性低下が認められ,また,Invasion assayではsiRNAのトランスフェクション群では浸潤能の低下を認めた.これまでの結果からsiRNAにより内在性のS100A4の発現は抑制され,転移・浸潤能に関連するE-cadherin,MMP-9と連動することにより,siRNAによるS100A4発現の低下がこれらの因子を介して,転移を抑制する可能性が示唆された.