siRNAを用いた膵臓癌でのS100A4遺伝子発現抑制と転移能に対する影響の検討

使用siRNA抑制胰腺癌中S100A4基因表达及其对转移潜能的影响研究

• 批准号: 18790977
• 负责人: 種田 靖久
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790977/
• 关键词: S100A4; 膵臓癌; siRNA; E-cadherin; 転移

膵臓癌の細胞株を用いた転移関連因子S100A4と細胞接着因子であるE-cadherinの発現,siRNAによる発現の抑制効果と転移関連因子に対する影響を確認した.(方法)膵臓癌細胞株PANC-1,MIAPaCa-2,CAPAN-2,BxPC-3を用いてA. real time PCRによりS100A4とE-cadherinの発現を比較検討した.B. S100A4に対するsiRNAを用いて内在性S100A4発現の抑制効果をreal time PCRで確認した.C. S100A4の発現抑制効果によるMMP-2,9に対する影響をzymographyによって検討した.D. S100A4発現抑制後の浸潤能をinvasion assayにより評価した.(結果)S100A4の発現はβ-actin比でPANC-1(0.95),MIAPaCa-2(0.82),CAPAN-2(0.13),BxPC-3(0.11)で,一方,E-cadherinはPANC-1(2.1),MIAPaCa-2(0.3),CAPAN-2(31.2),BxPC-3(17.5)となり臨床材料の結果と同様こS100A4とE-cadherinの発現量には,強い負の相関関係が認められた(P<0.05).内在性S100A4発現の最も高いPANC-1を用してS100A4siRNAの1-30nMを設定して最適効果濃度を検討し10nMが最適と考えられた.PANC-1に対するsiRNAのトランスフェション効果はコントロールに比べて最大で32%のS100A4発現抑制が得られた.それとともにE-cadherinの発現は12%上昇していた.S100A4発現抑制後のMMP-2には変化を認めなかったが,MMP-9では酵素活性低下が認められ,また,Invasion assayではsiRNAのトランスフェクション群では浸潤能の低下を認めた.これまでの結果からsiRNAにより内在性のS100A4の発現は抑制され,転移・浸潤能に関連するE-cadherin,MMP-9と連動することにより,siRNAによるS100A4発現の低下がこれらの因子を介して,転移を抑制する可能性が示唆された.

The cell line of cancer cell line was confirmed by the transfer of factor S100A4, the subsequent factor of cell and E-cadherin, and the inhibition of cell transfer by siRNA. (methods) Cancer cell line PANC-1,MIAPaCa-2,CAPAN-2 BxPC-3 uses "A. real time PCR", "S100A4", "E-cadherin". "B. S100A4", "siRNA", "siRNA", "internal S100A4", "real time PCR", "confirm", "C. S100A4", "MMP-2,9", "MMP-2,9", "zymography", "zymography", "S100A4", "immersion" and "invasion assay". (results) S100A4 measurements show that β-actin ratios of PANC-1, MIAPaCa-2, CAPAN-2, BxPC-3, and one side are similar to those of E-cadherin PANC-1, MIAPaCa-2, CAPAN-2, BxPC-3. The results show that the results are the same as those of bed materials. We need to pay attention to P&lt. 0.05). Internal S100A4 implements the most high-level PANC-1 using the maximum S100A4siRNA 1-30nM settings. The most effective 10nM is the most effective. Panc-1 does not change the performance of the siRNA. The results show that the suppression effect is higher than that of 32% of the maximum. After the inhibition of 12% of E-cadherin, the MMP-2 caused low enzyme activity, MMP-9 decreased enzyme activity, and Invasion assay caused low enzyme activity. S100A4 was inhibited. The results show that the intrinsic S100A4 of siRNA causes significant inhibition, and the effect of impregnation can improve the performance of MMPs. 9% of MMPs, the S100A4 of MMPs, the introduction of low-risk factors in S100A4, and the possibility of inhibition.