びまん性軸索損傷モデルにおけるMSP遺伝子および蛋白発現についての分子生物学的解析

弥漫性轴突损伤模型中MSP基因和蛋白表达的分子生物学分析

• 批准号: 18791024
• 负责人: 岡 雄一
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791024/
• 关键词: 蛋白; ミエリン; 修復; びまん性軸索損傷

MSP(Myelencephalon-specific protease)は,ラット・ヒトの脳脊髄に多く含まれ,特にoligodendroglia, microglia,neuronに認められるセリンプロテアーゼの一種で,我々は凍結損傷のモデルを用いた動物実験で,1-3日して損傷直下の白質にMSPmRNAと蛋白陽性のoligodendrocyteが出現し,浮腫の伸展に応じて損傷遠隔部位の白質にまでも陽性細胞が出現することを確認した。またmRNAと蛋白の発現は同時に平行して変化していた。本研究では,MSPがoligodendrocyteの活性化,ミエリンの修復過程に関与していることをラットびまん性軸損傷モデルにおいて検討した。まずびまん性軸索損傷モデルをMarmarouのモデルを基に作製した。ラットの頭蓋骨を露出して正中線上に金属プレートを固定し,包水クロラール腹腔内投与によって全身麻酔を施したラットをウレタンマットの上にのせて450gのおもりを高さ1.5mより金属プレートをめざして落下させて作成した。経時的に屠殺して灌流固定を行い,脳スライド切片を作製した。またクローニングしたMSPcDNAの断片よりsenseおよびantisenseRNAプローブを作成した。抗MSP抗体を用いた免疫染色ではoligodendrocyteが染色されず抗体濃度を変化させるなどして試みたが,期待されるような結果を得られなかった。今一度recombinant MSPを作成し直してアミノ酸配列のシークエンスを行ったところ,MSPの配列ではなくexpression vector由来のものであることが明らかとなった。これらの作業に想定外の時間を費やし今回の研究期間内に目標まで到達することはできなかった。

MSP（Myelencephalon-specific protease，髓脑特异性蛋白酶）α，髓脑特异性蛋白酶β，特别是少突胶质细胞，小胶质细胞，神经元特异性蛋白酶β，There is no significant difference between the two groups.本研究采用免疫组化、MSP法检测少突胶质细胞的活性，并与正常对照组比较，观察其免疫功能的变化。在这种情况下，必须对潜在的潜在危险性进行调查，并对Marmarou的行为进行评估。骨钙素骨钙素骨邵氏的羊脂素软膏剂流动固定行针，羊脂素软膏片作固定针。因此，MSPcDNA片段需要有义反义RNA的合成。抗MSP抗体采用琼脂免疫色染色法染色寡突胶质细胞，抗体度化法染色寡突胶质细胞瘤，期待琼脂糖凝胶电泳结果获得满意的结果。一定程度的重组MSP组成了直链构象的寡聚核苷酸配列体，MSP配列体的表达载体因其特异性而被阐明。これらの作業に想定外の時間を費やし今回の研究期間内に目標まで到達することはできなかった。