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一過性内耳虚血障害に対する骨髄幹細胞の再生医療

使用骨髓干细胞治疗短暂性内耳缺血性损伤的再生医学

基本信息

批准号：
18791216
负责人：
兵頭純
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究では一過性内耳虚血モデルを用い、造血幹細胞の蝸牛内投与による内耳障害の防御効果を探索するとともに、神経栄養因子の発現について検討した。鼓室階に注入した幹細胞の行方を調べる目的で、造血幹細胞(PKH67陽性細胞)を緑色の蛍光色素PKH67で染色して投与し、虚血負荷後4日目に標本を採取、これを4%PFA液にて固定しEDTAで脱灰後、厚さ10μmの凍結切片を作成して蛍光顕微鏡にて観察した。さらに虚血4日後に断頭し、速やかに蝸牛を摘出、ホモジナイズしてウエスタンブロット法によGDNF、BDNF,FGF1,FGF2,Ang1,NT3及びEPO蛋白測定を行った。画像解析ソフトを用いて発現バンドの定量的評価を行ない、幹細胞注入群とcontrol群で蛋白発現量を比較した。PKH陽性細胞は鼓室階に散在性にみられたが、コルチ器や周辺組織への侵入像はなく有毛細胞と置換や融合をおこすことはなかった。結果だが、今回、7つの栄養因子について蛋白発現を検討した結果、虚血負荷によりGDNFのみ発現が認められた。GDNFの発現量は、無処置群、control群、幹細胞注入群の順で多かった。以上より造血幹細胞を鼓室階にあらかじめ投与しておけば、虚血負荷による内耳障害が防御されることが示された。虚血障害が防御された機序としては、注入しておいた造血幹細胞が障害を受けた有毛細胞に分化、あるいは有毛細胞と融合し障害を回避できた可能性もあるが、むしろ幹細胞が栄養因子の一つであるGDNF合成を促進し内耳を保護した可能性が高い。GDNFはcontrol群でも増加がみられており、傷害急性期において生体防御システムの一貫として合成されるものと思われる。GDNFはフリーラジカルの産生抑制、アポトーシス誘導カスペースの抑制などの作用を有することが知られており、虚血性内耳障害の防御にも有効であると結論した。

This year's research focuses on the use of transient inner ear deficiency, the role of hematopoietic stem cells in the prevention of inner ear damage, and the development of neurotrophic factors. The stem cells were injected into the tympanum and stained with green pigment PKH67. Four days after hypoperfusion, the stem cells were collected, fixed in 4% PFA solution, deashed with EDTA, and frozen sections of 10μm thickness were prepared for observation under light microscope. 4 days later, the snails were cut off, and the protein levels of GDNF, BDNF, FGF1, FGF2,Ang1,NT3 and EPO were measured. The quantitative evaluation of stem cell injection and control protein production was carried out by using image analysis software. PKH positive cells are scattered in the tympanum, and the invasion of peripheral tissues is similar to that of hairy cells. The results showed that the expression of protein was detected by 7 factors, and the expression of GDNF was detected by 7 factors. GDNF production, non-treatment group, control group, stem cell injection group and so on. The above mentioned hematopoietic stem cells can be divided into two groups: one is the inner ear barrier, the other is the inner ear barrier. There is a high possibility that stem cells can protect the inner ear by promoting the synthesis of GDNF, and that there is a high possibility that stem cells can protect the inner ear by preventing the formation of a protective mechanism. GDNF control groups increase in severity, injury in acute phase, and biological defense systems in response to changes in severity. GDNF has the effect of inhibiting the production and induction of blood stasis.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Ginsenoside Rb1 protects against damage to the spiral ganglion cells after cochlear ischemia

DOI：
10.1016/j.neulet.2007.01.005
发表时间：
2007-03-26
期刊：
NEUROSCIENCE LETTERS
影响因子：
2.5
作者：
Fujita, Kensuke;Hakuba, Nobuhiro;Gyo, Kiyofumi
通讯作者：
Gyo, Kiyofumi

Hematopoietic stem cells prevent hair cell death after transient cochlear ischemia through paracrine effects

DOI：
10.1016/j.neuroscience.2006.12.067
发表时间：
2007-03
期刊：
Neuroscience
影响因子：
3.3
作者：
Tadashi Yoshida;N. Hakuba;Isao Morizane;Kensuke Fujita;Fang Cao;Pengxiang Zhu;N. Uchida;Kenji Kameda;M. Sakanaka;K. Gyo;Ryuji Hata
通讯作者：
Tadashi Yoshida;N. Hakuba;Isao Morizane;Kensuke Fujita;Fang Cao;Pengxiang Zhu;N. Uchida;Kenji Kameda;M. Sakanaka;K. Gyo;Ryuji Hata

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