遺伝性難聴の原因遺伝子COCHの機能解明

阐明导致遗传性听力损失的基因 COCH 的功能

• 批准号: 18791243
• 负责人: 齋藤 明彦
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791243/
• 关键词: 内耳; 遺伝子発現; 細胞培養

内耳細胞培養を用いたCochlinアイソフォーム発現メカニズムの解明。今年度は、ラット内耳fibrocyteのprimary cultureを用いた研究に着手した。1.我々の作成したCochlinアイソフォーム特異的抗体を用いたウェスタンブロットでアイソフォーム発現パターンを解析した。特異抗体による解析の結果、ラット内耳fibrocyteのprimary cultureではCochlinが非常に微量しか発現していないことが判明した。これは内耳のmicro-environmentがCochlin発現に必須であることを示す結果である。今後Cochlin発現調節の研究に重要な示唆を与えると考えられる。2.そこで、次にCochlinのmRNA発現を検討した結果、やはりmRNAレベルでも非常に微量の発現であったため、PCR産物のダイレクトシークエンシングを行ったところCochlinであることが確認された。今後、この遺伝子発現調節機構を検討する。2.COCH遺伝子発現の調節機構を探るために、内耳からcDNAを合成し、5'-RACE、3'-RACEを用いて異なる転写産物の有無並びに上流のUTR遺伝子配列を決定した。この結果、5'RACEでは一本のバンド、3'RACEでは長さの異なる3本のバンドを認めた。5'RACE産物の配列を解析した結果、転写開始部位はSignal配列の約50base上流、3'RACEでは転写開始点から約700base、約2000base、約2440base下流の3種であった。現在この配列の分子生物学的意義を解析している段階である。

Inner ear cell culture を is explained by を たCochlinア ア ソフォ ム ム ム. This year, <s:1> and ラット inner ear fibrocyte <s:1> primary cultureを used ラット た research に to start with た た. I 々 の made し た Cochlin ア イ ソ フ ォ ー を ム specific antibody with い た ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト で ア イ ソ フ ォ ー ム 発 now パ タ ー ン を parsing し た. Specific antibody に よ る analytical の results, ラ ッ ト inner ear fibrocyte の primary culture で は Cochlin が very に trace し か 発 now し て い な い こ と が.at し た. こ れ は inner ear の micro - environment が Cochlin 発 に must now で あ る こ と を で す results indicated あ る. In the future, Cochlin will conduct a moderating <s:1> study that に is important な to suggest を and えると to explore えられる. 2. そ こ で, に Cochlin の mRNA 発 を now beg し 検 た results, や は り mRNA レ ベ ル で も very に trace の 発 now で あ っ た た の め, PCR products ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン シ ン グ を line っ た と こ ろ Cochlin で あ る こ と が confirm さ れ た. In the future, the <s:1> cultural heritage 伝 will be distributed to the regulatory body を検 to discuss する. 2. COCH posthumous son 伝 発 is の regulator を agent る た め に, inner ear か ら cDNA を synthetic し, 5 '- RACE, 3' - RACE を with い て different な る product planning write の whether and び に upper の UTR heritage 伝 with sequence を decided し た. こ の results, 5 'RACE で は a の バ ン ド, 3' RACE で は long さ の different な 3 る の バ ン ド を recognize め た. The 5’race product <s:1> configuration を analysis <s:1> た result, 転 writing the starting position <s:1> Signal configuration <s:1> approximately 50base upstream, 3’race で で 転 転 writing the starting point ら ら approximately 700base, approximately 2000base, approximately 2440base downstream <s:1> three types であった. Now, the significance of <s:1> <s:1> in the matching of <s:1> molecular biology を analysis of て る る stages である.