唾液腺におけるD型アスパラギン酸の役割

高等哺乳動物の外分泌組織におけるD型アスパラギン酸の生理機能を解明するために,唾液腺をモデル系として研究を行ってきた。これまでに高濃度のD型アスパラギン酸がラット耳下腺腺房細胞と顎下腺線条部導管に存在することを明らかにした。そこで今回,プロテオーム解析法を用いて,D型アスパラギン酸によって発現が変化するタンパク質を網羅的・統括的に解析することを試みた。昨年度はラット耳下腺をターゲットにして実験を行ったので,今年度はラット顎下腺にターゲットをしぼって実験を行った。まずD型アスパラギン酸によって発現の変化するタンパク質分子を検索するために,コントロール群ラットには生理食塩水を,また対照群ラットには1mmol/kgになるようにD型アスパラギン酸を共に腹腔内に1週間連続投与した。1週間後にそれぞれのラットより顎下腺を摘出し,常法を用いて導管細胞からなる画分を調整した。これをホモジナイズし,全タンパク質を抽出した。それぞれより得られたタンパク質試料(100μgタンパク質)を一次元目は等電点,そして二次元目はSDS-PAGEにより二次元的に分離し,その中に含まれるタンパク質の質的・量的変化についてPDQuestソフトウエアを用いて網羅的に比較検討した。その結果,D型アスパラギン酸投与によって増加あるいは減少したタンパク質がそれぞれ検出された。現在,本結果の再現性を確認している。その後,これらの変化のあったタンパク質がどのような分子であるのかMS解析により調べる予定である。

高等哺乳動物の外分泌組織におけるD型アスパラギン酸の生理機能を解明するために,唾液腺をモデル系として研究を行ってきた。これまでに高濃度のD型アスパラギン酸がラット耳下腺腺房細胞と顎下腺線条部導管に存在することを明らかにした。そこで今回,プロテオーム解析法を用いて,D型アスパラギン酸によって発現が変化するタンパク質を網羅的・統括的に解析することを試みた。昨年度はラット耳下腺をターゲットにして実験を行ったので,今年度はラット顎下腺にターゲットをしぼって実験を行った。まずD型アスパラギン酸によって発現の変化するタンパク質分子を検索するために,コントロール群ラットには生理食塩水を,また対照群ラットには1mmol/kgになるようにD型アスパラギン酸を共に腹腔内に1週間連続投与した。1週間後にそれぞれのラットより顎下腺を摘出し,常法を用いて導管細胞からなる画分を調整した。これをホモジナイズし,全タンパク質を抽出した。それぞれより得られたタンパク質試料(100μgタンパク質)を一次元目は等電点,そして二次元目はSDS-PAGEにより二次元的に分離し,その中に含まれるタンパク質の質的・量的変化についてPDQuestソフトウエアを用いて網羅的に比較検討した。その結果,D型アスパラギン酸投与によって増加あるいは減少したタンパク質がそれぞれ検出された。現在,本結果の再現性を確認している。その後,これらの変化のあったタンパク質がどのような分子であるのかMS解析により調べる予定である。