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痛みの脊髄抑制路におけるモノアミントランスポーター発現動態についての研究

疼痛脊髓抑制通路中单胺转运蛋白的表达动态研究

基本信息

批准号：
18791367
负责人：
十川千春
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791367/
关键词：
トランスポーターノルエピネフリンドパミン疼痛

项目摘要

本研究は、モノアミントランスポーター発現動態の解析を申心に、疼痛に関わる下行性抑制系神経におけるモノアミントランスポーターの役割と疼痛制御への関与について検討し、歯科領域で問題となっている神経因性疼痛の有効な治療法の開発基盤を得ることを目的とする。われわれはこれまでに、ヒトDAT(hDAT)およびヒトNET(hNET>には、末梢組織においてエクソン6を欠失する新規のスプライシングバリアントが存在することを見出してきた。さらに、今年度はこれらのバリアントの発現および機能調節について検討を行った。hDAT、hNETの野生型(FL)およびエクソン6欠失バリアント(-EX6)をCOS-7細胞にそれぞれ形質導入し、3^Hラベルした基質の取り込みにより基質輸送活性を、また、ウエスタンブロッティング法および免疫染色法にて細胞局在について検討を行った。さらに免疫沈降法によりFLと-EX6の相互作用についても検討を行った。hDAT-EX6およびhNET-EX6はいずれも、基質輸送活性が著しく低下しており、hDAT-EX6はコカインのアナログであるWIN35,428の特異的結合がみられなかった。また、ウエスタンブロッティングの結果より、両バリアントともに膜への移行が著しく低下しており、hDAT-EX6はFL-hDATよりも膜への移行が著しく遅いことが分かった。さらに、hDATについて免疫染色の結果より、FL-hDATはC末端領域が細胞内へ存在するが、hDAT-EX6はC末端領域が細胞外へ局在していることが示唆された。次に、FLと-EX6の相互作用について調べるため、FL-hDATとhDAT-EX6を共発現させた場合、基質輸送活性のVmaxが著しく低下し、km値も低下していた。また、膜への発現も低下しており、FL-hDATとhDAT-EX6は細胞内でヘテロ二量体を形成することが明らかとなった。以上の結果より、ヒトカテコラミントランスポーターのエクソン6欠失バリアントは野生型と結合して野生型の膜移行を制御し、発現・機能調節に関与していることが明らかとなった。神経伝達物質であるノルエピネフリンおよびドパミンの再取り込み機構をつかさどるNETおよびDATの発現調櫛がアイソマーム間の相互作用により制御されている可能性が示唆された。

In this study, we have been able to analyze the state of action in the treatment of heart disease, the descending inhibition of pain, the prevention of pain, the treatment of pain, the prevention of pain, the prevention of pain, the treatment of pain, the prevention of pain, the prevention of pain, the treatment of pain, the prevention of pain, the This is due to the failure of DAT (hDAT), hNET> (net), and terminal organization (s). This is due to the failure of new rules. This year, this year, we will be able to meet the needs of the financial institutions. HDAT, hNET, wild type (FL), wild type (FL), wild type, (- EX6), COS-7, cell, cell, cell and cell. Immunoprecipitation method, FL-EX6 interaction method, immune precipitation method, immunoprecipitation method, immunoprecipitation The combination of hDAT-EX6, hNET-EX6, WIN35428, and hDAT-EX6 devices is sensitive to the performance of the device. In the first place, the results showed that the membrane was moved in the presence of low pressure, and that the membrane was transferred in the presence of hDAT-EX6 FL-hDAT. The results of immunocytochemistry and hDAT immunostaining, the presence of intracellular DNA in the C-terminal domain of FL-hDAT, and the presence of the extracellular domain in the C-terminal of hDAT-EX6. Secondary, FLV-EX6 interaction, FL-hDAT hDAT-EX6, Vmax activity, km activity, and so on. The structure of the membrane is low, and that of the FL-hDAT hDAT-EX6 is low, and the formation of the two-dimensional body is clear. The results of the above results show that there is a lack of information on the combination of wild-type membrane migration control, real-time monitoring and monitoring of membrane migration in the field. God knows how to use the information system to make sure that the NET system is used again. The DAT system shows that there are significant differences in the interaction between each other and the possibility of controlling the system.