P-糖タンパク質を介したスフィンゴ脂質の新規選択的吸収機構の解明

通过 P-糖蛋白阐明鞘脂的新型选择性吸收机制

• 批准号: 07F07176
• 负责人: 平田 孝
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07176/
• 关键词: スフィンゴシン; アポトーシス; Caco-2細胞; スフィンゴイド塩基; HepG2; P-糖タンパク質; 消化管吸収; 海洋生物; ナマコ

スフィンゴシン結合タンパク質をヒト小腸上皮様細胞に分化させたCaco-2細胞から分離した。Caco-2細胞はDMEM培地で15-17日間培養して分化させた。分化したCaco-2細胞を40μmのスフィンゴシンで2時間処理した。ついで細胞を溶解し、DEAE-celluloseカラムによる分離に供した。分離した画分を集め、脂質を抽出した。脂質はスフィンゴシンのピークを検出するためにHPLC分析に供した。スフィンゴシンを検出した分画のタンパク質を3-kDa限外ろ過フィルターで処理した。得られたタンパク質は10%SDS-PAGEに供した。得られた単一バンドについて、現在アミノ酸シーケンスを行っている。。さらに、ナマコから調製したスフィンゴイド塩基のヒト肝臓由来HepG2細胞に対するアポトーシス誘導活性を検討した。スフィンゴイド塩基の作用としてDNA断片化が認められた。また、アポトーシス誘導に重要な役割を担うBax protein、GADD45、PPAR-γ、DR5が顕著にアプレギュレートされた。一方、phospho-AKT proteinは減少した。これらの結果は、スフィンゴイド塩基がHepG2細胞にアポトーシスを誘導したことを示す。

Caco-2 cells were isolated from small intestine epithelial cells. Caco-2 cells were cultured in DMEM for 15-17 days and differentiated. Caco-2 cells differentiated at 40μm for 2 hours. Cell lysis, DEAE-cellulose separation Separation and extraction of lipids Lipid analysis by HPLC The 3-kDa limit on the number of molecules in the molecule is determined by the number of molecules in the molecule. 10% SDS-PAGE was used to obtain the protein. The first step is to open the door and open the door. In addition, the gene expression of HepG2 cells was detected. The role of DNA fragmentation in the development of DNA fragmentation. Bax protein, GADD45, PPAR-γ, DR5 are the most important proteins in the gene chain. One side, phospho-AKT protein decreased. These results demonstrate that SFDNF induces apoptosis in HepG2 cells.

项目成果

Sea cucumber sphingoid bases induce apoptosis and up-regulate Bax, GADD45 and PPAR-gamma in human hepatoma

海参鞘氨醇碱诱导人肝癌细胞凋亡并上调 Bax、GADD45 和 PPAR-gamma

• 发表时间: 2008
• 作者: Zakir Hossain;Tatsuya Sugawara;Takashi Hitara
• 通讯作者: Takashi Hitara