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植物・線虫相互作用解明のための植物寄生線虫の細胞壁分解酵素に関する生化学的研究

植物寄生线虫细胞壁降解酶的生化研究以阐明植物与线虫的相互作用

基本信息

批准号：
07F07576
负责人：
窪野高徳
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Forestry and Forest Products Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07576/
关键词：
エクスパンシン植物寄生線虫細胞壁分解酵素菌植生線虫 EST

项目摘要

線虫エクスパンシンの解析を行うため、植物寄生線虫マツノザイセンチュウ(Bursaphelenchus xylophilus)のcDNAライブラリーをスクリーニングし、エクスパンシン全長を含むcDNAをクローニングした。ゲノミックサザン解析の結果はエクスパンシンがゲノム中に遺伝子ファミリーとして存在していることを示し、in-situハイブリダイゼーション解析は本酵素が線虫の唾液腺で生産され、口針を通して外部へ分泌されていることを示した。種内での多様性を確認するため、日本産、ヨーロッパ産、強病原力、弱病原力を含む様々なポピュレーションからエクスパンシン遺伝子部位をPCR法により増幅し、塩基配列の比較を行った結果、イントロン部位に大きな違いが見られたものの、タンパク質レベルでは変異はほとんど見られなかった。線虫類の細胞壁分解酵素をより幅広く調べるため、新たに菌食性線虫Aphelenchus avenaeの増殖ステージcDNAライブラリーを構築した。菌食性線虫A.avenaeは系統的および生態的に菌食性線虫と植物寄生性線虫との境界に位置し、植物寄生性の進化を理解するのに重要なモデルである。さらにこの線虫の持つ乾燥状態で生存できる特別な能力はanhydrobiosisを理解するのに適したシステムである。A.avenaeの増殖ステージcDNAライブラリーを構築し、それを用いて5,000を超えるEST(Expressed Sequence Tag)を獲得した。ESTデータからはセルラーゼ、ペクチン分解酵素、1,3-グルカナーゼおよびエクスパンシンなどが発見された。この結果を持って、植物寄生線虫との比較解析をさらに推進することにより、植物寄生のストラテジーと進化を理解するのに役立つだろう。

The cDNA of the plant parasite Bursaphelenchus xylophilus was extracted from the whole length of the parasite. The results of the enzyme analysis showed that the enzyme was produced by the salivary glands of the worm and secreted by the external organs. The diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The results showed that the diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The results showed that the diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The diversity of intraspecies was confirmed by PCR. The construction of the cell wall enzymes of Aphelenchus avenae A.avenae is an important part of the ecosystem for understanding the location and evolution of plant parasitism. The special ability of these insects to survive in a dry state and to understand their hydrobiology A.avenae gene amplification cDNAs were constructed and used in 5,000 EST(Expressed Sequence Tag). EST The results of this study are as follows: Comparative analysis of plant parasites, evolution of plant parasites, etc.