種々の活性化刺激が豚卵子表層顆粒の分布と機能に及ぼす影響

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哺乳動物卵子への多数の精子侵入は異常な胚発生と胚の発生停止をもたらす。多精子受精を防ぐ主な要因として、種々の活性化刺激による卵子表層顆粒の放出に依存する多精子拒否機構が挙げられる。一方、豚卵子の体外受精においては高い頻度で多精子受精が生じ、体外で高率に正常受精卵を得られる方法は未だ確立されていない。本年度は、ブタ体外成熟卵子の表層顆粒の機能を解明する目的で、体外成熟卵子を予め電気活性化処理して表層反応を誘起後、体外受精させ、精子侵入状況を観察して表層反応が機能しているか否かを調べた。食肉センター由来の体外成熟卵子に電気パルスを1回印加し電気活性化処理した卵子は2時間培養後、媒精を行い、卵子の電気活性化処理の有無が精子侵入状況に及ぼす影響を調べた結果、精子侵入率は電気活性化処理区で対照区と比べ有意に低下した(P<0.05)。電気活性化処理を施した卵子は、細胞骨格阻害剤[10.4μMサイトカラシンBまたは1μMラトランキュリンA]を添加した培地で2時間培養後、媒精を行い、細胞骨格阻害剤の有無が精子侵入状況に及ぼす影響を調べた結果、精子侵入率は対照区と比べ、電気活性化処理単独区および電気活性化+細胞骨格阻害剤併用処理区で有意に低下した(P<0.05)。以上の結果から、電気活性化処理後に放出された表層顆粒は適度な精子濃度条件下では機能的な表層反応を誘起し、精子侵入を効果的に抑制することが明らかになった。さらに、体細胞核移植等に利用される細胞骨格阻害剤併用処理においても機能的な表層反応が誘起されることが示された。