外来遺伝子発現を持続させる遺伝子治療用DNA「ステルスDNA」の開発

开发用于维持外源基因表达的基因治疗的“隐形DNA”DNA

基本信息

  • 批准号:
    07J01326
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2007
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2007 至 2008
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

非ウイルスベクターの遺伝子発現は一過的であり、その主要因DNAの転写抑制(silencing)である。我々はこれまでに、hydrodynamics法を用いた遺伝子導入後に観察されるsilencingがCpGモチーフのメチル化および、ヒストン蛋白質の修飾非依存的に生じ、silencingを受けたプラスミドDNA(pDNA)が再活性化し得ることを示している。このことから、持続的に発現する遺伝子治療用DNAの開発において、「silencingの回避」に加えて「積極的な活性化」が必要であると考え、外来DNA特異的転写活性化システムを利用した持続発現型DNAの開発を行った。酵母GAL4蛋白質の配列特異的DNA結合ドメインと単純ヘルペスウイルスVP16蛋白質の転写活性化ドメインの融合蛋白質(GAL4-VP16)を用い、GAL4認識配列をレポーター(ルシフェラーゼ)遺伝子pDNAに付加するとともに、GAL4-VP16発現pDNAにも付加し、podiyibr feedbackによる両pDNAの持続的な発現を指向した。両pDNAをHeLa細胞に共導入した結果、ルシフェラーゼ遺伝子の発現が持続化した。特に、GAL4認識配列を両PDNAの発現カセットの上流に加えて、下流にも付加することで、CMVプロモーター制御下の高い発現レベルを低下させること無く維持することに成功した。さらにマウス肝臓において、肝臓特異的アルブミンプロモーター制御下の発現の消失半減期を大きく延長することに成功した。以上の結果は、持続的に発現する遺伝子治療用DNAの開発において「積極的な活性化」の重要性を示唆するものである。
This is mainly due to DNA silencing. In response to this, hydrodynamics method was used to detect the silencing of CpG molecules after gene introduction, and to detect the inactivation of DNA(pDNA) after protein modification independent of gene, silencing, and reactivation. In the development of DNA for gene therapy,"silencing and avoidance" is added to "active activation". In the development of DNA for gene therapy,"silencing and avoidance" is added to "active activation". DNA binding to yeast GAL4 protein sequence specific DNA binding sites, pure sites, VP16 protein activation sites and fusion proteins (GAL4-VP16) were used. GAL4-VP16 protein sequence recognition sites, pDNA binding sites, GAL4-VP16 pDNA binding sites and podiybr feedback sites were used to detect pDNA binding sites. The results of co-introduction of pDNA into HeLa cells show that the development of pDNA remains stable. In particular, GAL4 recognizes the alignment of PDNA and its upstream and downstream components, and CMV and its downstream components, and its downstream components. In addition, we have successfully extended the half-time period for the discovery of liver-specific ALL-BLIND monitor control. The above results demonstrate the importance of "active" activation in the development of DNA for gene therapy.

项目成果

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专利数量(0)
Hydrodynamics-based transfection procedure transiently activates expression of preexistent transgene.
基于流体动力学的转染过程瞬时激活预先存在的转基因的表达。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Li Tian;Sei-ichiro Kamata;Hiroshi Ochiai
  • 通讯作者:
    Hiroshi Ochiai
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