シスタチオニンγ-シンターゼ遺伝子の新生ポリペプチドを介した翻訳停止機構の研究

胱硫醚γ-合酶基因新生多肽介导的翻译终止机制研究

• 批准号: 07J01372
• 负责人: 川崎 大輔
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01372/
• 关键词: ヒメツリガネゴケ; シロイヌナズナ; シスタチオニンγ-シンターゼ; 翻訳停止; mRNA分解; S-アデノシルメチオニン; リボソーム; 分子生物学

植物のシスタチオニンγ-シンターゼ(CGS)遺伝子では,新生ペプチドが作用して翻訳中のリボソームが一時的に停止し,それと共役してmRNAが分解される.このような翻訳停止に伴うmRNA分解による制御は他に例がない.そこで,本研究では翻訳停止とmRNA分解の分子メカニズムを明らかにすることを目的としている.今年度得た結果は次の通りである.1.翻訳停止時にリボソームのP部位,A部位に位置するアミノ酸は,翻訳の停止に重要であることが示されているが,ヒメツリガネゴケとシロイヌナズナではこの位置のアミノ酸配列は異なっている.リボソームやその他の翻訳因子が両者の系で異なることが,この違いを生んでいるのではないかと考え,シロイヌナズナの一過的発現系と試験管内翻訳系,ヒメツリガネゴケの一過的発現系を用いた解析を行い,系による違いを比較した.その結果,P部位,A部位に位置するコドンだけではなく,その前後のコドンも制御の強さに影響を与えることが示唆され,現在詳細な解析を行っている.2.一般的なRNA分解やRNA品質管理を行う場としてP bodyという構造体が知られているが,CGS mRNA分解にP bodyが関与するかを調べるためにバイオイメージング法によるアプローチを試みている.P bodyの構成因子とCGS mRNAを可視化させるための形質転換株の作出を行った.薬剤耐性や導入した蛍光プローブを指標とした選抜を行い,PCRによる導入遺伝子の確認を行っている.導入遺伝子は過剰発現プロモーターを用いる設計としたが,過剰発現プロモーターよりもネイティブプロモーターによる制御の方が細胞内観察が容易にできる可能性を示唆する結果を得たため,内在の遺伝子に蛍光タンパク質遺伝子をノックインする方法も同時に行うこととした.

Plant の シ ス タ チ オ ニ ン gamma シ ン タ ー ゼ (CGS) posthumous son 伝 で は, newborn ペ プ チ ド が role し て in turn 訳 の リ ボ ソ ー ム が に stop し, そ れ と し total service て mRNA が decomposition さ れ る. こ の よ う な turn 訳 stop に with う mRNA decomposition に よ る suppression は he に example が な い. そ こ で, this study で は 訳 stop と The purpose of mRNA decomposition is と molecule メカニズムを, ら にする にする とを, と て, て る. Our results have た は times の tong り で あ る. 1. Double 訳 stops に リ ボ ソ ー ム の P site, A site に position す る ア ミ ノ acid は, double 訳 の stop に important で あ る こ と が shown さ れ て い る が, ヒ メ ツ リ ガ ネ ゴ ケ と シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ で は こ の position の ア ミ ノ acid with column は different な っ て い る. リ ボ ソ ー ム や そ の he の 訳 because Child が struck is の is で different な る こ と が, こ の violations い を raw ん で い る の で は な い か と え, シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ after の 発 now is と 訳 department, test tube ヒ メ ツ リ ガ ネ ゴ ケ の after 発 department を now use い た parsing を い, department に よ る) い を compare し た. そ の results, P, A site に position す る コ ド ン だ け で は な く Before and after, そ の の コ ド ン も suppression の strong さ に influence を and え る こ と が in stopping さ れ, line now detailed analytical を な っ て い る. 2. General decomposition や な RNA RNA quality management を lines う field と し て P body と い う constructs が know ら れ て い る が, CGS mRNA decomposition に P body が masato and す る か を adjustable べ る た め に バ イ オ イ メ ー ジ ン グ method に よ る ア プ ロ ー チ を try み て い る. P body の constitute factor と CGS The mRNAを visualizes the させるため <s:1> shape and mass 転 transplanting of the <s:1> strain to make を rows った. 薬 tonic patience や import し た 蛍 light プ ロ ー ブ を index と し た sorting line を い, PCR に よ る import legacy 伝 son の confirm line を っ て い る. Import legacy 伝 son ever は turning 発 now プ ロ モ ー タ ー を with い る design と し た が, a turning 発 now プ ロ モ ー タ ー よ り も ネ イ テ ィ ブ プ ロ モ ー タ ー に よ る suppression の square 観 examine が が cell easy に で き を る possibility in stopping す る results た を た め, inner の heritage 伝 son に 蛍 light タ ン パ ク qualitative heritage 伝 son を ノ ッ ク イ ン す る methods も う に line Youdaoplaceholder2 とと た.

项目成果

CGS遺伝子における新生ペプチドが介する翻訳アレストとmRNA分解:ヒメツリガネゴケをモデルとした研究

CGS 基因中新生肽介导的翻译停滞和 mRNA 降解：使用苔藓立碗藓作为模型的研究

• 发表时间: 2008
• 作者: Ayumi Saruwatari;Yasunori Watanabe;猿渡亜由未・渡部靖憲;Ayumi Saruwatari;猿渡亜由未;猿渡亜由未;猿渡亜由未;川崎大輔;川崎 大輔
• 通讯作者: 川崎 大輔

シスタチオニンγ-シンターゼ遺伝子の翻訳停止とmRNA分解:ヒメツリガネゴケを用いた解析

胱硫醚 γ-合酶基因的翻译终止和 mRNA 降解：使用立碗藓 (Physcomitrella) 进行分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Ayumi Saruwatari;Yasunori Watanabe;猿渡亜由未・渡部靖憲;Ayumi Saruwatari;猿渡亜由未;猿渡亜由未;猿渡亜由未;川崎大輔;川崎 大輔;川崎大輔
• 通讯作者: 川崎大輔

新生ペプチドによる翻訳の停止と共役したmRNA分解

mRNA 降解与新生肽翻译终止相结合

• 发表时间: 2009
• 作者: Ayumi Saruwatari;Yasunori Watanabe;猿渡亜由未・渡部靖憲;Ayumi Saruwatari;猿渡亜由未;猿渡亜由未;猿渡亜由未;川崎大輔
• 通讯作者: 川崎大輔

Nascent peptide-mediated translation elongation arrest coupled with mRNA degradation in the CGS gene of Physcomitrella patens

小立碗藓 CGS 基因中新生肽介导的翻译延伸停滞与 mRNA 降解相结合

• 发表时间: 2007
• 作者: Ayumi Saruwatari;Yasunori Watanabe;猿渡亜由未・渡部靖憲;Ayumi Saruwatari;猿渡亜由未;猿渡亜由未;猿渡亜由未;川崎大輔;川崎 大輔;川崎大輔;Daisuke Kawasaki
• 通讯作者: Daisuke Kawasaki