線形動物ミトコンドリア翻訳系に関する研究

线虫线粒体翻译系统的研究

• 批准号: 07J01409
• 负责人: 末松 卓真
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01409/
• 关键词: ミトコンドリア翻訳系; 線形動物; 翻訳伸長因子; リボソーム; EF-G1; EF-Tu

本年度は、線形動物ミトコンドリア(mt)リボソームの精製への試みと、線形動物mt翻訳因子を用いた試験管内タンパク質合成系の再構築に必要な、翻訳伸長因子EF-G1/G2の組換えタンパク質の大量調製を行った。mtリボソームの精製については、昨年度までに作製した形質転換線虫とは別に、Protein Aとカルモジュリン結合タンパク質とを並列に繋いだペプチドタグをC末端側に付加した、mtリボソームタンパク質前駆体候補遺伝子の組換え体を発現する形質転換線虫の作製を試みた。残念ながら、現段階では形質転換線虫の作製には至っていない。また、昨年度までに作製していたヒスチジンタグ及びSタグを並列に付加したmtリボソーム小サブユニットのS2タンパク質を発現する形質転換体を用いても、mtリボソームの精製を達成することはできなかった。mt EF-Gについては、本年度は、大腸菌を用いた線虫(C.elegans)ミトコンドリア(mt)EF-G2の大量発現系を構築し、精製に成功した。mt EF-G2は、mtEF-G1の相同体であり、真核生物に幅広く存在することが知られているが、その機能については未だ詳細な解析は行われていなかった。得られたEF-G2組換え体について、大腸菌リボソームを用いてリボソーム依存的なGTP加水分解反応の有無を測定したところ、大腸菌EF-GやC.elegans mt EF-G1と比較して、約20分の1程度ではあるが、GTP加水分解能を有していた。しかし、大腸菌翻訳因子によるin vitro翻訳系での解析の結果、EF-G1と異なり、EF-G2はtranslocation活性を保持していなかった。この結果から、EF-G2は、タンパク質生合成系においてEF-G1とは異なる生理的役割を担っている可能性が示唆される。また、これらの成果は、線形動物mtタンパク質合成系の試験管内での再構築に向けた大きな一歩であると言える。

This year, the linear animals were tested for the refinement of the molecular structure, and the linear animals were tested for the re-construction of the molecular structure synthesis system. The molecular structure of the molecular structure was modified by the transformation of the elongation factor EF-G1/G2. In addition, in the last year, the preparation of the Protein A and protein A of the protein A of the protein A and protein A of the protein A of the protein A and protein A of the protein In the present stage, it is impossible to change the quality of the thread. In the past year, we have made great efforts to improve the quality of products and services, and we have made great efforts to improve the quality of products. This year, a large number of production systems of mt EF-G have been successfully constructed and refined for Escherichia coli and C.elegans. mtEF-G2 and mtEF-G1 are identical, eukaryotic, and functional. EF-G2 group conversion system, Escherichia coli conversion system, GTP hydrolysis system dependent on the presence or absence of detection, Escherichia coli EF-G and C.elegans mt EF-G1 comparison, about 20 minutes to 1 degree, GTP hydrolysis system. Analysis results of E. coli transformation factor in vitro transformation system, EF-G1 and EF-G2 translocation activity are maintained The results show that EF-G2 and EF-G1 have different physiological functions. The results of this study are as follows: 1. Reconstruction of linear animal mtDNA synthesis system in test tubes