TRAILによる細胞死誘導機構の解析とその耐性の克服

TRAIL诱导细胞死亡机制分析及克服其耐药性

基本信息

批准号：
07J01621
负责人：
田中浩
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01621/
关键词：
がん耐性シグナル伝達アポトーシス

项目摘要

代表者は、がん細胞におけるTRAIL誘導性細胞死の解明を目的として、質量分析を用いTRAIL受容体の新規結合タンパク質PRMT5を見出した。このPRMT5はTNFRスーパーファミリーの中でもTRAIL受容体であるDR4/DR5と選択的に結合した。PRMT5を標的とするsiRNAを導入した各種がん細胞ではTRAILによる細胞毒性が増加したが、正常線維芽細胞株では感受性化は認められなかった。また、PRMT5を安定発現するHCTIl6細胞を樹立したところ、TRAILへの耐性を示した。以上より、がん細胞においてPRMT5はTRAILが誘導する細胞死を抑制していることが明らかになった。さらに、PRMT5ノックダウン時にはTRAILが誘導するlkappaBalpha分解が阻害されることを見出した。このlkappaBalpha分解阻害は、上流のIKK複合体のキナーゼ活性抑制に起因することと、TNF処理時には見られず、TRAIL刺激選択的であることが示唆された。次に、IkappaBalphaの下流に位置するNF-kappaBの活性化を定量した。TRAILによるNF-kappaB活性化はPRMT5ノックダウンにより顕著に減弱したが、 TNF刺激では大きな変化は見られなかった。さらに、PRMT5をノックダウンしたHT1080細胞にGFPタグを付加した活性化型のIKKbetaを遺伝子導入したところ、活性化型IKKbetaの発現はTRAILによるアポトーシスを大幅に減少させた。これらの結果から、PRMT5はNF-kappaBの活性化を介してTRAILによるアポトーシスを阻害していることが考えられる。TRAILの臨床応用を進める上では、一部のがん細胞が示す耐性の克服が大きな課題となる。本研究の成果から、PRMT5を分子標的とすることによってTRAILの抗腫瘍効果を選択的に増強できる可能性が期待される。

代表使用质谱法发现了癌细胞中跟踪诱导的细胞死亡，以发现PRMT5，这是一种新型的TRAIL受体结合蛋白。该PRMT5在TNFR超家族中有选择地与TRAIL受体DR4/DR5结合。尽管在靶向PRMT5的siRNA引入的各种癌细胞中，径向诱导的细胞毒性增加了，但正常的成纤维细胞细胞系不易感。此外，当建立稳定表达PRMT5的HCTIL6细胞时，它们表现出对步道的抗性。从以上，已经揭示了PRMT5抑制了越野诱导的癌细胞中的细胞死亡。此外，我们发现在PRMT5敲低期间抑制了Trail引起的Lkappabalpha降解。 lkappabalpha降解的这种抑制归因于上游IKK复合物的激酶活性的抑制，在TNF治疗过程中未见，这表明它是被刺激的。然后对位于Ikappabalpha下游的NF-kappab的激活进行了量化。 PRMT5敲除通过TRAIL激活NF-kappab激活，但是在刺激TNF时未观察到显着变化。此外，当用激活的IKKBETA转染了击倒PRMT5的HT1080细胞并添加了GFP标签时，激活的IKKBETA的表达大大降低了由TRAIL引起的凋亡。这些结果表明，PRMT5通过激活NF-kappab抑制了跟踪诱导的凋亡。在促进TRAIL的临床应用时，克服某些癌细胞表现出的抗性是一个主要挑战。这项研究的结果表明，PRMT5可能能够选择性地增强跟踪的抗肿瘤效应。