マルチPK抗体を用いた細胞内プロテインキナーゼの解析法の確立と糖尿病研究への応用

多重PK抗体胞内蛋白激酶分析方法的建立及其在糖尿病研究中的应用

基本信息

批准号：
07J01637
负责人：
杉山康憲
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の研究計画に基づいて「糖尿病モデルラットを用いた糖尿病発症および合併症に関するプロテインキナーゼの探索」を行った。本実験で使用した糖尿病モデルラットであるOLETFおよびコントロールラットであるLETOは大塚製薬徳島研究所より分与して頂いた。OLETFラットおよびLETOラットの雄を糖尿病発症前の12週齢、糖尿病発症後の25週齢および40週齢的合併症が発症すると考えられる老齢の60週齢に解剖し、脳、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、すい臓、精巣を摘出した。各臓器抽出液を調製し、抽出液中に存在するプロテインキナーゼをマルチPK抗体を用いて検出した。その結果、各臓器抽出液から多数のプロテインキナーゼのバンドが検出された。このうちM1C抗体を用いて25週齢のOLETFラットを解析すると、すい臓において約110kDaおよび約200kDaのバンドが検出され、これらのバンドはLETOラットでは検出されなかった。これらの結果から、この約110kDaおよび約200kDaのバンドは糖尿病の発症に関わるセリン/スレオニンキナーゼであると考えられた。また、40週齢のLETOラットをYK34抗体を用いて解析すると、精巣において約150kDaのバンドが見られたが、OLETFラットでは検出されなかった。これらの結果は、約150kDaのチロシンキナーゼがLETOラットと比較してOLETFラットで発現量が顕著に減少することから、糖尿病発症後において精巣で見られる男性生殖器の機能不全に関わるプロテインキナーゼである可能性が考えられる。現段階では、これらのプロテインキナーゼの同定はできていないが、今後これらを同定することで糖尿病の発症や合併症の解明に繋がると予想される。

根据今年的研究计划，我们进行了“使用糖尿病大鼠模型的大鼠搜索与糖尿病发育和并发症有关的蛋白激酶”。 OLETF是该实验中使用的模型糖尿病大鼠，而对照大鼠Leto则由Otsuka Pharmaceutical Tokhima Research Institute分布。在糖尿病之前，在12周龄，糖尿病后25周和40周的雄性OLETF和LETO大鼠在60周时出现并发症，然后除去大脑，肺，心脏，肝脏，肾脏，脾脏，胰腺和睾丸。制备每个器官提取物，并使用多PK抗体检测到提取物中存在的蛋白激酶。结果，在每个器官提取物中检测到许多蛋白激酶带。其中，当使用M1C抗体分析25周龄的OLETF大鼠时，在胰腺中检测到约110 kDa和约200 kDa的频带，在Leto大鼠中未检测到这些条带。这些结果表明，大约110 kDa和大约200 kDa波段是参与糖尿病发展的丝氨酸/苏氨酸激酶。此外，当使用YK34抗体分析40周龄的Leto大鼠时，在睾丸中发现了大约150 kDa的带，但在Oletf大鼠中未发现。这些结果表明，与Leto大鼠相比，OLETF大鼠表达的大约150 kDa酪氨酸激酶显着降低，这使得它可能是糖尿病发作后睾丸中与雄性生殖器功能障碍有关的蛋白激酶。在此阶段，尚未确定这些蛋白激酶，但是预计将来识别它们将导致糖尿病和并发症的阐明。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II触媒断片のチロシンキナ-ゼ活性

Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II催化片段的酪氨酸激酶活性

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yamamoto R;Yanagisawa HA;Yagi T;Kamiya R,;Yasunori Sugiyama;Yasunori Sugiyama;Isamu Kameshita;Yasunori Sugiyama;Isamu Kameshita;Noriyuki Sueyoshi;金子啓介;杉山康憲;金子啓介;杉山康憲
通讯作者：
杉山康憲

担子菌キノコのストレス応答性プロテインキナーゼの解析

担子菌应激反应蛋白激酶的分析

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
金子啓祐;杉山康憲;末吉紀行;亀下勇
通讯作者：
亀下勇

Ca2+/CaM依存性プロテインキナーゼホスファターゼ(CaMKP)阻害剤のスクリーニング

筛选 Ca2+/CaM 依赖性蛋白激酶磷酸酶 (CaMKP) 抑制剂

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Sugiyama;Y;Murao;K.;Imachi;H.;Sueyoshi;N.;Ishida;I.;Kameshita;I.;金子啓祐,山田裕介,末吉紀行,渡邉彰,麻田恭彦,亀下勇;下村幸子,永峰賢,波多野直哉,末吉紀行,亀下勇;山田裕介,西田哲之,杉山康憲,末吉紀行,渡邉彰,麻田恭彦,亀下勇;沖野望,井上豪,岡野浩幸,上林浩二,合田(問註所)初美,谷元洋,末吉紀行,角田佳充,伊東信;杉山康憲,村尾孝児,井町仁美,末吉紀行,石田俊彦,亀下勇;濱崎大介,関口茉里,大下幸助,波多野直哉,徳田雅明,末吉紀行,末武勲,田嶋正二,亀下勇;沼野琢旬,末吉紀行,高尾俊彦,石田敦彦,谷口隆信,二村貴樹,杉山康憲,茂里康,亀下勇
通讯作者：
沼野琢旬,末吉紀行,高尾俊彦,石田敦彦,谷口隆信,二村貴樹,杉山康憲,茂里康,亀下勇

マウスDNAメチルトランスフェラーゼ1のDNA結合活性はカゼインキナーゼ1によるリン酸化によって制御される

小鼠 DNA 甲基转移酶 1 的 DNA 结合活性受酪蛋白激酶 1 磷酸化的调节

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
杉山康憲;関口茉里;末吉紀行;波多野直哉;木下英司;木下恵美子;小池透;末武勲;田嶋正二;亀下勇
通讯作者：
亀下勇

Calmodulin-dependent protein kinase IV regulates insulin secretion under the glucotoxic condition in INS-1 rat insulinoma cell line

钙调蛋白依赖性蛋白激酶 IV 在糖毒性条件下调节 INS-1 大鼠胰岛素瘤细胞系的胰岛素分泌

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yamamoto R;Yanagisawa HA;Yagi T;Kamiya R,;Yasunori Sugiyama;Yasunori Sugiyama;Isamu Kameshita;Yasunori Sugiyama;Isamu Kameshita;Noriyuki Sueyoshi;金子啓介;杉山康憲;金子啓介;杉山康憲;Yasunori Sugiyama
通讯作者：
Yasunori Sugiyama