概日時計の細胞内振動ならびに細胞間同調を担うリン酸シグナリング

磷酸盐信号传导负责细胞内振荡和生物钟的细胞间同步

• 批准号: 10J03287
• 负责人: 杉山 康憲
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J03287/
• 关键词: 生物時計; サーカディアンリズム; 時計タンパク質; プロテインキナーゼ; 細胞内局在; タンパク質リン酸化; シグナル伝達; モノクローナル抗体

約1日周期の生体リズムが安定に保たれるためには、ひとつひとつの細胞が持つリズムが同調することが重要である。これまでに、細胞間のリズム同調に関わるリン酸化シグナル因子をマルチPK抗体を用いて探索したところ、細胞膜上のラフトにおいて夜(ZT16)に存在量が上昇し、非ラフト膜においては昼(ZT4)に存在量が上昇する48 kDaおよび58 kDaのSre/Thrキナーゼを見出した。これらのキナーゼは細胞間のシグナル伝達において時刻依存的な制御を担うと考えられた。そこで当該年度においては、ラフトにおいて存在量が日内変動するキナーゼを同定し、機日時計におけるラフトの重要性について追及した。まず、これらのキナーゼを同定するため、昼(ZT4)および夜(ZT16)の時刻に摘出したマウス脳からラフト画分を調製した。このラフト画分をMALDI-TOF MSにより解析したところ、48 kDaのキナーゼとしてキナーゼXを同定した。キナーゼXの細胞膜上における動態をキナーゼX特異的な抗体を用いて解析したところ、細胞膜上のラフトにおけるキナーゼXの存在量は夜(ZT16)に上昇し、非ラフト膜においては昼(ZT4)に上昇していた。ラフトと非ラフト膜におけるキナーゼXの存在量が逆位相の日周変動を示すことから、キナーゼXは一日の中でラフトと非ラフト膜の間を移行し得ると考えられる。次に、マウスの時計中枢である視床下部の視交叉上核(SCN)におけるラフトの重要性を明らかにするために、PER2::LucマウスのSCNスライスを培養して発光リズムを測定し、ラフト破壊薬であるmethyl-β-cyclodextrin(MβCD)の効果を調べた。その結果、マウスSCNスライスの発光リズムはMβCD処理により短周期化した。以上の結果から、細胞膜上のラフトを介したシグナル伝達機構が概日時計の周期を制御する可能性が考えられた。

About 1-day cycle of organisms to maintain stability, stability, and coherence. The presence of pK antibody in the cell membrane increased in the middle of the day (ZT16), and the presence of Sre/Thr antibody in the non-membrane increased in the middle of the day (ZT4). This is the first time that a person has ever been involved in a relationship with another person. When the year is over, the amount of time is present, the amount of time is constant, the amount of time is important, and so on. The time of day (ZT4) and night (ZT16) is modulated. MALDI-TOF MS is a 48 kDa molecule. X-specific antibodies were analyzed and the amount of X-specific antibodies on the cell membrane increased during the night (ZT16) and during the day (ZT4). The existence of the non-linear film is the opposite of the phase of the daily cycle. In addition, the timing center of the optic bed is located in the lower part of the optic bed, and the importance of the SCN nucleus is clearly indicated. PER2::Luc's SCN nucleus is cultured, and the optical emission is measured. The effect of methyl-β-cyclodextrin(MβCD) is modulated. As a result, the SCN process was short-circuited. The above results show that the mechanism of cell membrane formation is possible to control the cycle of cell membrane formation

项目成果

Calcium/calmodulin-dependent protein kinase IV involvement in the pathophysiology of glucotoxicity in rat pancreatic β-cells.

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 IV 参与大鼠胰腺 β 细胞糖毒性的病理生理学。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Metabolism 60(1)
• 作者: Sugiyama Y.;Murao K.;Imachi H.;Sueyoshi N.;Ishida T.;Kameshit I.
• 通讯作者: Kameshit I.

Phosphorylation of CLOCK correlates with CLOCK-containing complex formation in mice

CLOCK 的磷酸化与小鼠中含有 CLOCK 的复合物形成相关

• 发表时间: 2011
• 作者: 遠藤圭太;荒川圭太;藤川清三;遠藤圭太;遠藤圭太;遠藤圭太;K.Endoh;K.Endoh;Keisuke Kaneko;Yasunori Sugiyama;Takaki Nimura;Kentaro Hirose
• 通讯作者: Kentaro Hirose

Exploration of diurnal variation in protein levels and intracellular localization of protein kinases in the mouse brain

小鼠大脑中蛋白质水平的昼夜变化和蛋白激酶的细胞内定位的探索

• 发表时间: 2011
• 作者: 遠藤圭太;荒川圭太;藤川清三;遠藤圭太;遠藤圭太;遠藤圭太;K.Endoh;K.Endoh;Keisuke Kaneko;Yasunori Sugiyama;Takaki Nimura;Kentaro Hirose;Yasunori Sugiyama
• 通讯作者: Yasunori Sugiyama

マウス脳におけるプロテインキナーゼの発現と細胞内局在の日内変動

小鼠脑中蛋白激酶表达和亚细胞定位的昼夜变化

• 发表时间: 2010
• 作者: 遠藤圭太;荒川圭太;藤川清三;遠藤圭太;遠藤圭太;遠藤圭太;K.Endoh;K.Endoh;Keisuke Kaneko;Yasunori Sugiyama;Takaki Nimura;Kentaro Hirose;Yasunori Sugiyama;杉山康憲;金子啓祐;片山将一;杉山康憲
• 通讯作者: 杉山康憲

植物Ndrキナーゼの自己チロシンリン酸化活性

植物 Ndr 激酶的自酪氨酸磷酸化活性

• 发表时间: 2010
• 作者: 片山将一;杉山康憲;末吉紀行;寺地徹;亀下勇
• 通讯作者: 亀下勇