G蛋白質によるカリウムチャネル制御機構の構造生物学的および電気生理学的研究

G蛋白钾通道控制机制的结构生物学和电生理学研究

• 批准号: 07J01798
• 负责人: 横川 真梨子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01798/
• 关键词: イオンチャネル; NMR; 3量体G蛋白質; 相互作用解析; G蛋白質

NMR法を用いて、GβγによるGIRK開閉機構の立体構造の観点からの解明をさらに進めた。具体的には、GIRK-Gβγ間相互作用のNMR解析に必要なGIRK細胞内領域の主鎖アミドプロトンの帰属を進めることにより93%の帰属を完了し、データベースに登録した(BMRB accession number:11067)。帰属に基づき、転移交差飽和実験と化学シフト摂動(CSP)実験結果より、GIRK上のGβγ結合部位および結合に伴う構造変化領域の同定を行った。その結果、GβγはGIRKのT238,E240,G241,E242,F243,L333,K339,E350を含む分子側面のサブユニット境界面に結合し、サブユニット間の相対配置を変化させることにより、Gβγ結合面から離れたβH-βIストランド間に位置するGループを含む細胞内ポア表面やN末端領域に構造変化を誘起することが明らかとなった。全長構造中においてGループは膜貫通領域のinner helixと近接し、N末端領域はouter helixに連結していることから、これらの部位に生じた構造変化は膜貫通領域に伝播し、ゲートの開口に寄与し得ると判断した。生体内におけるGPCR-G蛋白質-GIRK複合体形成機構の解明によるGIRK制御機構解明に向けて、Gα_<i3>とRGS4を調製し、(1)RGS4(2)Gα<i3>(3)Gα_<i3>-RGS4(4)Gαβγについて、GIRK細胞内領域を観測対象としたCSP実験を行った。その結果、(1)RGS4(2)Gα_<i3>(3)Gα_<i3>-RGS4において相互作用を示す結果を得たが、(4)Gαβγにおいて相互作用を示す結果は得られなかった。このことは、活性化時にGα_<i3>やRGS4、Gα_<i3>-RGS4がGIRK近傍に集積することを示唆しており、この局在は不活性化したGα_<i3>がGβγを迅速に回収することを可能とするため、チャネル活性の解除に寄与すると考えられる。一方、本研究においてGαβγとGIRKの相互作用は検出されなかったが、両者の相互作用はGIRKの素早い活性化に重要と考えられており、本研究に含まれないGIRKの領域やGα_<i3>の脂質修飾などが関与する可能性があるため、さらなる解析が必要である。

The NMR method を is explained by を て, Gβγによる, GIRK opening and closing mechanism <s:1> three-dimensional structure <e:1> 観 point ら ら ら をさらに into めた. Specific に は, interaction between GIRK - G beta gamma の NMR analytical に necessary な GIRK field の main locks ア ミ ド プ ロ ト ン の 帰 genus を into め る こ と に よ り 93% の 帰 finished を し and デ ー タ ベ ー ス に login し た (BMRB accession number: 11067). 帰 genus に base づ き, poor planning over saturated be 験 と chemical シ フ ト, move (CSP) be 験 results よ り beta gamma combining site, GIRK の G お よ び combining に with う structural variations change field の with fixed line を っ た. そ の results, G beta gamma は GIRK の T238, E240, G241, E242, F243, L333, K339, on を containing む molecular profile の サ ブ ユ ニ ッ ト boundary surface に し, サ ブ ユ ニ ッ ト の phase between configuration seaborne を variations change さ せ る こ と に よ り, G beta gamma joint surface か ら from れ た beta H - beta I ス ト ラ ン ド に position between す る G ル ー プ を containing む intracellular ポ ア surface や に structure - N terminal fields を induced す る こ と が Ming ら か と な っ た. Span structure in に お い て G ル ー プ は transmembrane domain の inner helix と near the field of し, N terminal は outer helix に link し て い る こ と か ら, こ れ ら の parts に raw じ た structure - the は transmembrane domain に 伝 し feeding, ゲ ー ト の openings に send with し る と judgment し た. Born in vivo に お け る GPCR - G protein - GIRK complex formation institutions の interpret に よ る GIRK system royal institution interpret に to け て, G alpha _ < i3 > と RGS4 を し, (1) modulation RGS4 alpha (2) G < i3 > alpha _ (3) G < i3 > - RGS4 (4) G alpha beta gamma に つ い て, GIRK intracellular を 観 Test object: と た たCSP experiment: を line った. RGS4 そ の results, (1) (2) G alpha _ < i3 > alpha _ (3) G < i3 > - RGS4 に お い て interaction を shown the result of す を た が alpha, beta, gamma, (4) G に お い て interaction を shown the result of す は ら れ な か っ た. こ の こ と は, activeness に G alpha _ < i3 > や RGS4, G alpha _ < i3 > - RGS4 が GIRK nearly alongside に set product す る こ と を in stopping し て お り, こ の bureau in は activeness し た G alpha _ < i3 > が G beta gamma を に quickly back to 収 す る こ と を may と す る た め, チ ャ ネ ル active の remove に send す る と exam え ら れ る. One party, this study に お い て G alpha beta gamma と GIRK の interaction は 検 out さ れ な か っ た が interaction, struck の は GIRK の element early い activeness に important と exam え ら れ て お り, this study contains に ま れ な い GIRK の field や G alpha _ < i3 > の lipid modification な ど が masato and す る possibility が あ る た め, さ ら な る parsing が necessary Youdaoplaceholder0.

项目成果

GβγによるG蛋白質共役型内向き整流性カリウムチャネル開閉機構の構造生物学的解析

Gβγ诱导G蛋白偶联内向整流钾通道开/闭机制的结构生物学分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 横川真梨子;大澤匡範;村松隆宏;竹内恒;嶋田一夫
• 通讯作者: 嶋田一夫