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B型肝炎ウイルスの肝細胞侵入・増殖機構の構造基盤と立体構造に基づく創薬

基于乙型肝炎病毒肝细胞侵袭增殖机制的结构基础和三维结构的药物发现

基本信息

批准号：
21K06494
负责人：
横川真梨子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、B型肝炎ウイルス（HBV）が肝細胞に侵入する際に必須のpreS1とNTCPの相互作用、およびHBVの増殖時に必要なpreSとキャプシド（Cp）の相互作用を原子分解能で明らかにすることでHBVの肝細胞侵入・増殖のメカニズムを解明すること、さらに明らかにした相互作用様式に基づき、その相互作用を阻害する化合物を抗HBV薬候補化合物として提唱することを目的としている。2022年度は、preS1に結合してNTCPとの相互作用を阻害することが報告されているカテキン二量体であるoolonghomobisflavan C (OHBF-C) とpreS1との相互作用を原子レベルで明らかにすることを目指した。10^-6 MのpreS1溶液に1当量のOHBF-Cを添加すると沈殿が生じ、沈殿にはpreS1とOHBF-Cが含まれていたことから、preS1とOHBF-Cが直接結合することを確認した。また、等温滴定型カロリメトリーより、preS1には複数分子のOHBF-Cが結合することが分かった。さらに、preS1上のOHBF-C結合部位を絞り込むため、preS1を5分割した部分ペプチドを調製し、各ペプチドとOHBF-Cの相互作用を溶液NMR法により調べた。その結果、OHBF-Cは全ての部分ペプチドと結合し、Proを含む疎水性残基と相互作用することが分かった。一方で、OHBF-Cの部分構造であるepigallocatechin gallate (EGCG) では、部分ペプチドとの相互作用がOHBF-Cに比べて著しく減弱していた。OHBF-CはEGCGが2個連結した構造を有することから、OHBF-CとPreS1は互いに多価で結合することが強く示唆された。

In this study, the interaction between preS1 and NTCP, which is necessary for hepatitis B virus (HBV) to invade hepatocytes, and the interaction between preS1 and NTCP (Cp), which is necessary for HBV to proliferate, were studied. Anti-HBV candidate compounds are proposed for the purpose of inhibiting the interaction. In 2022, the interaction between preS1 and NTCP was blocked. This report indicates that the interaction between preS1 and Oolonghomobisflavan C (OHBF-C) was blocked by the interaction between preS1 and NTCP. 10^-6 M preS1 solution 1 equivalent of OHBF-C is added to the preS1 solution and OHBF-C is directly bound to the preS1 solution. Isothermal titration of OHBF-C complex molecules OHBF-C binding sites on preS1 were modulated by 5-segment modulation, and the interaction between OHBF-C and preS1 was modulated by solution NMR. As a result, OHBF-C is completely free of binding, and Pro is free of binding and interaction. Part of the structure of OHBF-C is epigallocatechin gallate (EGCG). Part of the interaction between OHBF-C is weaker than EGCG. OHBF-C has 2 links, and OHBF-C has 2 links.