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超分子ナノマシン細菌べん毛モーターを再構成して機能を探る

超分子纳米机器重建细菌鞭毛马达并探索其功能

基本信息

批准号：
07J02549
负责人：
檜作洋平
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02549/
关键词：
大腸菌べん毛モーター Pリング固定子複合体ジスルフィド架橋ペプチドグリカンキメラタンパク質外膜リポタンパク質超分子ナノマシン機能的再構成固定子タンパク質システインスキャニングシステインクロスリンク

项目摘要

細菌のべん毛モーターは運動器官としては生物最小の転モーターである。本研究の目的はべん毛基部体構成因子であるPリングと固定子タンパク質MotBを架橋させることで固定子を回転子とともに単離し、完全な状態のべん毛モーターを単離・再構成することである。昨年度の研究によってPリングを構成するFlgIとMotB間のジスルフィド架橋をタンパク質レベルで確認するところまで達成した。本年度の研究では、さらに架橋方法の探索を推し進め、菌の運動能を損なうことなくFlgIとMotBを架橋する方法を見出した。また、検出された架橋の一部はべん毛に組み込まれたPリングと固定子の間での架橋を反映していることを示唆する結果を得た。これらの結果は、本研究の目的である固定子付きのべん毛モーターの単離に大きく近づくものであり、さらに今まで推測の域を出なかったPリングと固定子の間の相互作用の存在を示唆する初めてのデータである。これと並行して、FlgIとの架橋が確認されたMotB C末端領域のPGBドメインの機能・構造解析を行った。MotBのC末端PGB領域を他の3種のPGBタンパク質のPGB領域と切り換えたキメラMotBを作製し、MotBとしての機能を調べた。作製したキメラMotBは機能しなかったが、キメラ発現株から運動能復帰変異体の取得を試みたところ、外膜リポタンパク質Palとのキメラから、P159L、F172Vという2種の運動能復帰変異体を取得した。F172V変異はPGとの結合能には変化を与えなかったことから、MotBとPalのPGB領域はPG結合能という点で機能的に互換性があることが示された。さらにMotB変異体とPalの立体構造との比較から、MotBとPalのPGB領域の構造的な類似性も示唆された。

The bacteria are the smallest of the moving organs. The purpose of this study is to study the structure factors of hair base, the structure factors, the structure factors of hair base, the structure factors, the Last year's study confirmed that there was a gap between FlgI and MotB This year's research has been carried out to explore ways to improve the sports performance of bacteria. A part of the bridge is a part of the bridge. The bridge is a part of the bridge. The results of this study indicate that the interaction between the fixed molecules and the fixed molecules exists. The analysis of the function and structure of the PGB in the terminal area of MotB was carried out. MotB's C terminal PGB field has three other PGB fields. MotB's C terminal PGB field has three different PGB fields. 2 kinds of motion energy recovery and acquisition of different kinds of motion energy recovery and acquisition of different kinds of motion energy recovery and acquisition of different kinds of motion energy recovery and acquisition of different kinds of motion energy recovery F172V is different from PG and its binding energy is different from MotB and PGB. PG binding energy is different from functional interchangeability. The comparison of the three-dimensional structure of MotB and Pal, the similarity of the structure of MotB and Pal in PGB domain, and the comparison of MotB and Pal in PGB domain are discussed.