ゼブラフィッシュ内胚葉性器官の形成異常を示すimsetyの責任遺伝子の機能解析

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本年度は、imsetyと同様に内胚葉性器官の発生に異常を示すmorendo(mor)変異体の解析を重点的に行った。<1.Morタンパク質の細胞内局在>Morタンパク質が機能する細胞内領域を調べるため、FLAGペプチドで標識したMorタンパク質をゼブラフィッシュ胚で発現させ、抗FLAG抗体を用いて抗体染色を行った。その結果、Morタンパク質は核に局在することが明らかとなった。<2.microRNAのプロセシングの観察>Morタンパク質がmicroRNAの生合成に機能していることが予想された。microRNAとは、20数baseの小分子RNAで、翻訳阻害を行うことが報告されている。mor変異体で、microRNAの生合成過程の異常を調べるために、内胚葉性器官で発現するmicroRNAを、Northern blottingや半定量的RT-PCRで検出したところ、MicroRNAの前駆体が減少していることが明らかとなった。<3.Morタンパク質の機能ドメインの探索>Morタンパク質は幾つかのドメインを有している。Morタンパク質の機能を詳細に理解するために、いくつかのドメインに変異を挿入した変異型Morタンパク質をmor変異体に発現させ、表現型の回復の有無により、Morタンパク質のmicroRNA生合成に機能するドメインを探索した。その結果、ATP結合ドメインがMorタンパク質の機能に必要であることが示唆された。これら3つの結果から、Morタンパク質は核内で、ATPの分解によるエネルギーを用いて、microRNA前駆物質の転写または維持・安定化に機能していることが予想される。