哺乳動物細胞の人為的リプログラミング誘導に関する研究

哺乳动物细胞人工重编程诱导的研究

• 批准号: 07J05258
• 负责人: 宮本 圭
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J05258/
• 关键词: リプログラミング; 無細胞抽出系; 卵母細胞; 脱分化; 核移植; プロテオー; ブタ; 遺伝子発現; 細胞膜透過; アフリカツメガエル

本研究は、卵細胞質から調整した無細胞抽出系を用いて、哺乳動物体細胞のリプログラミング誘導と細胞分化制御系の開発を目的とした。本年度は、(1)抽出液処理によってリプログラミングを誘導した細胞の、体細胞核移植におけるドナー細胞としての有用性の検討と(2)ブタ卵を用いた無細胞抽出系の開発と幹細胞の作出、に重点をおいて実験を行う計画を立てた。アフリカツメガエル卵抽出液で処理した細胞を核移植のドナー細胞として用いたところ、顕著な発生能の向上は認められなかったため、(2)の研究を中心に行った。昨年度に開発したブタ卵抽出系は、哺乳類で初めての機能的な卵抽出系であり、この実験系のさらなる発展は意義深い。昨年度までの研究において、ブタ卵抽出液で処理した細胞は部分的に脱分化するのだが、長期間の培養には失敗していた。この細胞を人工多能性細胞(iPS細胞)作出に用いられる細胞培養条件下におくことによって、長期培養に成功した。現在この脱分化細胞の株化を行っている。また、ブタ卵抽出系を卵内リプログラミング因子の同定のために応用した。卵抽出液処理前後で体細胞核内へと取り込まれるタンパク質をプロテオーム解析により20個以上同定した。このうち、1つのタンパク質に注目し、リプログラミングにおける役割を調べた。卵細胞質におけるこのタンパク質の機能を阻害した結果、核移植胚特異的な発生能の低下がみられ、同定タンパク質が卵内に存在するリプログラミング因子である可能性が示唆された。哺乳類卵内でリプログラミングに係る因子はほとんど同定されていない現状からも、本研究の重要性が考えられる。

は this study, the egg quality か ら adjustment し た cell free out of を い て, mammalian somatic の リ プ ロ グ ラ ミ ン グ induced suppression is の と cell differentiation open 発 を purpose と し た. は this year, (1) extract 処 Richard に よ っ て リ プ ロ グ ラ ミ ン グ を induced し の た cells, somatic cell nuclear transfer に お け る ド ナ ー cells と し て の usefulness の beg と 検 (2) ブ を タ eggs with い た cell free spare is の open 発 の と stem cells make, に key を お い て be 験 を line う plan を made て た. ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル eggs extract で 処 Richard し を た cell nuclear transfer の ド ナ ー cells と し て in い た と こ ろ, 顕 な 発 birth to の は upward to recognize め ら れ な か っ た た め, (2) を の research center line に っ た. Yesterday annual に open 発 し た ブ タ eggs take は, early mammals で め て の functionary な eggs out department で あ り, こ の be 験 is の さ ら な る 発 exhibition は い deep meaning. Yesterday's annual ま で の research に お い て, ブ タ eggs extract で 処 Richard し た cell は part に dedifferentiation す る の だ が, long-term の cultivate に は failure し て い た. こ の を artificial pluripotent cells (iPS cells) to make に い ら れ る cell culture conditions に お く こ と に よ っ て, long-term training に success し た. Now the <s:1> <s:1> dedifferentiated <s:1> cell lines are を rows って る る る. Youdaoplaceholder0 and ブタ oocyte retrieval are determined by を リプログラ <s:1> <s:1> グ グ factors <s:1> in the を oocyte, and ために応 is used for た た. Before and after the treatment of the oocyte aspiration fluid, へと from the nuclei of で somatic cells were taken to obtain <s:1> 込まれるタ パ パ をプロテ をプロテ ム ム ム analysis によ によ more than 20 are determined to be た. <s:1> うち, 1 タ タ パ パ パ パ パ に に に pay attention to グにおける, リプログラ リプログラ リプログラ グにおける グにおける グにおける を cut を べた. Egg mass に お け る こ の タ ン パ ク qualitative の function を resistance against し た results, nuclear transfer embryo specific な 発 birth to low の が み ら れ, with fixed タ ン パ ク qualitative が に exist inside an egg す る リ プ ロ グ ラ ミ ン グ factor で あ が る possibility in stopping さ れ た. Mammalian egg で リ プ ロ グ ラ ミ ン グ に department る factor は ほ と ん ど with fixed さ れ て い な い status quo か ら も importance, this study の が exam え ら れ る.

项目成果

Reversible Membrane Permeabilization of Mammalian Cells Treated with Digitonin and Its Use for Inducing Nuclear Reprogramming by Xenopus Egg Extracts

• DOI: 10.1089/clo.2008.0020
• 发表时间: 2008-12-01
• 期刊: CLONING AND STEM CELLS
• 作者: Miyamoto, Kei;Yamashita, Teruyoshi;Imai, Hiroshi
• 通讯作者: Imai, Hiroshi

DNA demethylation associated with nuclear reprogramming of the somatic cell genome in cell-free extracts from mammalian oocytes

DNA去甲基化与哺乳动物卵母细胞无细胞提取物中体细胞基因组的核重编程相关

• 发表时间: 2008
• 作者: K. Miyamoto;T. Tsukiyama;Y. Yang;N. Li;N. Minami;M. Yamada;H. Imai
• 通讯作者: H. Imai

Reversible permeabilization of mammalian somatic cells treated with digitonin for reprogramming and dedifferentiation by Xenopus cell-free system

用洋地黄皂苷处理的哺乳动物体细胞可逆透化，通过非洲爪蟾无细胞系统进行重编程和去分化

• 发表时间: 2008
• 作者: K. Miyamoto;T. Yamashita;N. Minami;M. Yamada;H. Imai
• 通讯作者: H. Imai

Reprogramming events of mammalian somatic cells induced by Xenopus laevis egg extracts

• DOI: 10.1002/mrd.20691
• 发表时间: 2007-10-01
• 期刊: MOLECULAR REPRODUCTION AND DEVELOPMENT
• 影响因子: 2.5
• 作者: Miyamoto, Kei;Furusawa, Tadashi;Imai, Hiroshi
• 通讯作者: Imai, Hiroshi

Cell-Free Extracts from Mammalian Oocytes Partially Induce Nuclear Reprogramming in Somatic Cells

• DOI: 10.1095/biolreprod.108.073676
• 发表时间: 2009-05-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Miyamoto, Kei;Tsukiyama, Tomoyuki;Imai, Hiroshi
• 通讯作者: Imai, Hiroshi