マウス胚を用いた細胞分裂非依存的リプログラミング系の構築

使用小鼠胚胎构建不依赖于细胞分裂的重编程系统

• 批准号: 15H06753
• 负责人: 宮本 圭
• 金额: $ 1.25万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06753/
• 关键词: リプログラミング; 核移植; 細胞分裂; 転写; マウス

本研究では、マウス初期胚を用いて、哺乳類胚で初めて細胞分裂非依存的に転写の初期化（転写リプログラミング）を誘導するシステムを開発し、最終的に開発したシステムを利用してリプログラミング誘導に関わる因子を同定することを目標とする。従来の核移植法は、第二減数分裂中期の卵子（MII卵）を使用し、体細胞核を卵子に移植後、転写のリプログラミングが開始するまで必然的に細胞分裂を伴うものである。すなわち、転写の阻害を評価する上で、細胞分裂の影響やDNA複製の影響も考慮する必要が生じていた。これらの理由により、哺乳類において、転写のリプログラミングを直接誘導できる卵内因子は未だほとんど同定されていない。当該年度においては、細胞分裂非依存的に転写リプログラミングを誘導できる核移植系の開発を当初の計画通り行った。まず、細胞周期阻害剤を利用して、転写活性の高いと考えられるG2期にマウス4細胞期胚を停止させる方法を検討した。多くの胚がG2/M期に停止する処理条件を発見し、停止したマウス4細胞期胚を核移植のレシピエントとして利用した。ドナー細胞にはOct4-GFPリポーターを有するマウス胎児繊維芽細胞を使用し、転写リプログラミングはGFPの蛍光によって確認した。核移植後48時間以内に、移植された体細胞核を有する割球にのみGFPのシグナルが確認でき、細胞分裂がない状態でも転写リプログラミングが誘導できる可能性が示唆された。今後RNAシークエンシングを用いてゲノムワイドレベルでリプログラムされる遺伝子を同定し、本システムの有効性をより詳細に評価する。本研究の成果は、細胞分裂非依存的に、直接的にリプログラミング因子をスクリーニングできる基盤システムの構築につながる。

In this study, the use of primary embryos and mammalian embryos in the early stage of cell division is independent of the initial stage of cell division in mammalian embryos. in this study, the early stage of embryo and mammalian embryos are independent of cell division in the early stage of this study. The method of nuclear transplantation, the use of oocytes in the second metaphase of meiosis (MII eggs), the use of oocytes in somatic nuclei after transplantation, and the necessary mitosis of oocytes in the second metaphase of meiosis. It is necessary to have a copy of the DNA copy in the upper part of the cell. The cause of the disease, the breast cancer, the mother, the In that year, when the cell division is not dependent on the nuclear transfer system, which is not dependent on cell division, it will lead the nuclear transfer system to start the program. The method of stopping the cell cycle of embryos in G _ 2, G _ 2, G _ Multi-stage embryo G2ram M phase stops the treatment condition, stops the cell stage embryo nuclear transfer, stops the cell stage embryo nuclear transfer, and makes use of it. If you have an Oct4-GFP, you can use it. You need to write it. You need to GFP it to confirm it. Within 48 hours after nuclear transplantation, the nucleus of the transplanted animal was detected in the nucleus of the transplanted body. The nucleus of the transplanted body was confirmed by GFP, and the cell division was confirmed. The possibility of nuclear transplantation was indicated. From now on, RNA will tell you that you will have sex in the future. In this study, we report the results of this study, which is independent of cell division, and the direct cell division is independent of cell division.

项目成果

Reprogramming of somatic nuclei towards totipotency is greatly facilitated by small molecules through epigenetic alterations

小分子通过表观遗传改变极大地促进了体细胞核向全能性的重编程

• 发表时间: 2016
• 作者: 姜京守;姜京守;安達智史;安達智史;姜京守・Yeonkwon Jung;安達智史;Satoshi Adachi;黒川優;安達智史;宮本 圭
• 通讯作者: 宮本 圭

卵細胞における体細胞核の階層的クロマチン構造の変化と転写リプログラミングにおける役割

卵细胞体细胞核染色质分层结构的变化及其在转录重编程中的作用

• 发表时间: 2015
• 作者: Chiba M;Togashi Y;Bannno E;Kobayashi Y;Nakamura Y;Hayashi H;Terashima M;De Velasco MA;Sakai K;Fujita Y;Mitsudomi T;Nishio K.;安達智史;宮本 圭
• 通讯作者: 宮本 圭