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メダカ内臓逆位変異体abecobeを用いた左右性形成機構の解明

利用青鳉内脏倒转突变体abecobe阐明偏侧性形成的机制

基本信息

批准号：
07J07895
负责人：
加村啓一郎
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J07895/
关键词：
発生メダカ左右

项目摘要

本研究では、内臓が左右逆転したメダカ突然変異体abecobeの原因遺伝子pkd111を解析することによって、左右性形成機構の解明を目指している。・Pkd111とPkd2の相互作用解析(免疫共沈降)Pkd111とPkd2を培養細胞で強制発現させた上で、それぞれにつけたタグに対する抗体を使用して免疫共沈降をおこなった。その結果、Pkd111はC末側でPkd2と相互作用することがわかった。・Pkd2の細胞内局在の確認クッペル胞におけるPkd2の細胞内局在を、抗Pkd2抗体を用いた免疫染色により確認した。その結果、Pkd2は繊毛上に局在していることがわかった。また、abecobeにおいてPkd2の繊毛上への局在が失われていたことから、Pkd2の繊毛上への局在にはPkd111が必要であることがわかった。・Pkd111の細胞内局在の確認クッペル胞におけるPkd111の細胞内局在を、抗Pkd111抗体を用いた免疫染色により確認した。その結果、Pkd111はクッペル胞内の全ての繊毛上に局在していることがわかった。また、abecobeにおいてPkd111の繊毛上への局在が失われていたことから、抗Pkd111抗体の特異性も示された。・left-right dynein(LRD)の分布パターンの確認クッペル胞におけるLRDの分布パターンを、抗LRD抗体を用いた免疫染色により確認した。その結果、クッペル胞内の全ての繊毛上に局在していることがわかった。これは、過去にマウスで報告されていた、周辺の繊毛のみに原曲しているという結果と異なる結果となった。

This study aims to analyze the causes of the sudden change of heterozygote and the mechanism of its formation. Analysis of the interaction between Pkd111 and Pkd2 (immune co-precipitation) Pkd111 and Pkd2 in cultured cells are stressed, and antibodies are used in response to stress. Pkd111 and Pkd2 interact with each other at the end of C. Pkd2 intracellular localization was confirmed by immunostaining with anti-Pkd2 antibodies. Pkd2 Pkd2 and Pkd 111 are in the middle of the game, and Pkd2 and Pkd111 are in the middle of the game. Pkd111 intracellular localization was confirmed by immunostaining with anti-Pkd111 antibodies. Pkd111 is the result of a complete cell cycle. The specificity of anti-Pkd 111 antibodies was demonstrated by the presence of anti-Pkd 111 antibodies. The distribution of left-right dynein(LRD) was confirmed by immunostaining with anti-LRD antibodies. The result is that the cell is full of hair. This is the first time that I've ever been to a school.