遺伝子治療薬の生体内投与後の毒性発現機構解析

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アデノウイルス(Ad)ベクターは既存のベクターの中では最も遺伝子導入効率に優れており、in vivoでの遺伝子導入も可能なことから、種々の疾患に対する遺伝子治療用ベクターとして使用されている。しかし、Adベクターを生体へ投与した場合、炎症性サイトカインやインターフェロン(IFN)の産生をはじめとする自然免疫応答が惹起されることが知られており、Adベクターの安全性向上のためには、Adベクターにより誘導される自然免疫応答のメカニズムを解明することが重要な課題と考えられている。そこで本年度は自然免疫応答を惹起するようなウイルス側因子の同定を試みた。ウイルス側責任因子としては、(1)ウイルスの殻であるカプシドタンパク質、(2)ウイルスゲノムDNA、(3)ウイルスの転写産物などが考えられる。昨年度の結果より、AdベクターによるIFNの産生にRNAが関与している可能性が示唆されていたこと、Adと同じくDNAウイルスであるEBウイルスがコードする小分子RNAであるEBERが自然免疫応答の受容体に認識されその後IFNの産生を惹起するとの報告があったことから、Adがコードする小分子RNAであるVA-RNAに着目した。VA-RNAがRNAポリメラーゼIIIにより転写されることから、まずRNAポリメラーゼIII阻害剤を用いて検討を行った。その結果、阻害剤の濃度依存的にAdベクターによるIFNの産生が低下していた。このことからRNAポリメラーゼIIIにより転写されるRNAがAdベクターによるIFNの産生に関与していることが示唆された。次に、VA-RNAの直接的関与について検討を行うため、野生型AdもしくはVA-RNA領域を欠損させたAdを用いた。その結果、骨髄細胞よりGM-CSFを用いて誘導を行った樹状細胞だけでなくマウス胎児線維芽細胞においてもVA-RNAによりIFNの産生が惹起されることがはじめて明らかとなった。