マウス胚性幹細胞の神経細胞への分化誘導に関する研究

小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经细胞的研究

• 批准号: 07J53173
• 负责人: 北澤 彩子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Toyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J53173/
• 关键词: マウス胚性幹細胞(ES細胞); 脊髄後根神経節(DRG); 培養上清液(CM); 運動ニューロン; 分画液; NGF被覆微小磁気ビーズ

マウス胚性幹細胞(ES)細胞から均一なES細胞コロニーを得ることを目的とし、浮遊培養により形成させたES細胞コロニーの未分化状態及びコロニー形成率を検討した結果、直径200μmのコロニーが多数形成され、且つ10日間培養しても未分化状態を維持していることが明らかになった。神経細胞への分化誘導効果を持つことを明らかにしている脊髄後根神経節(DRG)のconditioned medium(CM)を、直径200μmのコロニーに添加して培養し、分化した神経細胞の種類を同定した結果、分化した神経細胞は主に運動ニューロンであり、分化した神経細胞のうちの50%を占めることが明らかになった。この結果は、感覚ニューロンであるDRG神経細胞から分泌された可溶性物質により、そのターゲットニューロンである運動ニューロンにES細胞の分化誘導が促進されたことを示しており、本研究により初めてターゲット細胞へのES細胞の分化誘導を示唆したものである。限外ろ過フィルターを用いてDRG-CMを分画し、各分画液の神経細胞への分化誘導効果を検討した結果、分子量10,000以上の分画液にDRG-CMと同程度の分化誘導効果が得られた。しかし、5,000以下の分画液にも、無添加に比較して分化誘導効果があった。DRG-CM内には高分子物質の他に低分子物質の分化誘導因子が示唆され、現在誘導物質を特定する研究を行なっている。NGFで被覆した微小磁気ビーズと磁石を用いて、ES細胞から分化した神経細胞のみを磁石領域内に分離・固定する方法について検討した結果、磁石領域内に神経線維を伸長している多くの神経細胞が観察されたことから、特定の細胞を分離・固定する方法を開発することが出来き、今後、分離・固定した細胞を回収する研究を行う予定である。

Embryonic stem cells (ES) were cultured in vitro for 10 days, and most of the cells with a diameter of 200μm were formed. The differentiation of neurons induced by the addition of conditioned medium(CM) of 200μm in diameter to the DRG was determined by the same results, differentiation of neurons induced by the addition of conditioned medium(CM) of 200μm in diameter to the DRG. The results show that DRG cells secrete soluble substances, and the differentiation of ES cells is promoted. In addition, DRG-CM was used to analyze the results of differentiation induction of neurocytes in various fractions. DRG-CM was used to analyze the results of differentiation induction of neurocytes in fractions with molecular weights of more than 10,000. The results of differentiation were compared with those of the control solution below 5,000 DRG-CM contains high molecular weight substances, low molecular weight substances, differentiation inducing factors, and current inducing substances. NGF is coated with tiny magnetic particles, ES cells are differentiated, neurons are isolated and immobilized in the magnetic field, and the results of the investigation are discussed. The number of neurons in the magnetic field is detected, and the method of isolation and immobilization of specific cells is developed. The future, isolation and immobilization of cells is studied.

项目成果

脊髄後根神経節培養液の添加によりマウス胚性幹細胞から分化した神経細胞の種類の検討

添加脊髓背根神经节培养基检测小鼠胚胎干细胞分化的神经元类型

• 发表时间: 2007
• 作者: Takahashi;T.;Ikeda;K;Hasegawa;T;Yoshihiro Hasegawa;宮本琢也・前川佳一・矢寺顕行・加護野忠男;宮本琢也;宮本琢也;宮本琢也・前川佳一;Hiromi Sato;Hiromi Sato;松田 和希;松田 和希;北澤 彩子
• 通讯作者: 北澤 彩子

Characterization and isolation of neurons differentiated from mouse ES cells by DRG-conditioned medium

DRG 条件培养基从小鼠 ES 细胞分化而来的神经元的表征和分离

• 发表时间: 2007
• 作者: Takahashi;T.;Ikeda;K;Hasegawa;T;Yoshihiro Hasegawa;宮本琢也・前川佳一・矢寺顕行・加護野忠男;宮本琢也;宮本琢也;宮本琢也・前川佳一;Hiromi Sato;Hiromi Sato;松田 和希;松田 和希;北澤 彩子;北澤 彩子
• 通讯作者: 北澤 彩子