Analysis of CILP (cartilage intermediate layer protein ) transgenic mice with lumbar disc disease susceptibility

CILP（软骨中间层蛋白）转基因小鼠腰椎间盘疾病易感性分析

• 批准号: 18689903
• 负责人: SEKI Shoji
• 金额: $ 15.55万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18689903/
• 关键词: CILP; lumbar disc disease; transgenic mice; 腰椎椎間板; トランスジェニックマウス; 椎間板ヘルニア; 椎間板変性

背景: 我々は腰椎椎間板ヘルニア患者のDNAサンプルで、大規模な相関解析を行い、CILP遺伝子(cartilage intermediate layer protein)のI395Tにおいて有意な相関を見出した。さらにin vitroの機能解析から、CILP蛋白の高発現が椎間板変性に関わる可能性を見出した(Seki S et al, Nature Genet, 2005)。研究の目的:CILPトランスジェニックマウス(以下Tg マウス)を作成し、表現型の解析やin vivoにおけるCILPの役割を詳細に検討すること。方法: CILP Tg マウスの作成の方法は、軟骨特異的発現ベクター pNASS…(COL11A2 promoter、IVS1) を用い、このベクターにCILP遺伝子(C末にHA tagを挿入)を導入しマイクロインジェクションによってTg マウスを作成する。またこのTg マウスを用い、表現型を解析する。結果: CILP Tg マウスのlineの維持および繁殖遺伝子導入はPCR、mRNAはreal-time PCR法で確認し、CILP蛋白の発現解析は、HA抗体、N末、C末抗体の3種類使用し、これらでウエスタンブロット、免疫染色でTg マウスにおけるCILP蛋白の発現を確認できた。CILP Tg マウスの表現型の解析椎間板の構造(髄核、線維輪)を、組織学的に確認すると、サフラニン-O染色にて髄核組織の染色性が有意にTg マウス群で低下していた。さらに脊椎椎間板をMRIで評価すると、Tg マウスの腰椎MRIT2強調画像において、腰椎椎間板の輝度はノーマルマウスと比べて低下していたことから、明らかな椎間板変性の進行が認められたと考えられる。またTg マウスとノーマルマウスで、腰椎レントゲン上の椎間板高の違いを有意に認めている。CILP Tg マウスの頚椎椎間板変性、ヘルニアモデルの作成マウスの頚椎に不安定性を導入すると頚椎椎間板変性、ヘルニアができることがわかっており、このモデルで、変性誘導後の頚椎椎間板をレントゲン、組織学的評価を現在行っている。

Background: We have identified significant correlations between DNA profiles, large-scale correlation analysis, and I395T of CILP intermediate layer protein in lumbar intervertebral disc disease patients. Recently, the functional analysis of in vitro and the possibility of high expression of CILP protein related to intervertebral plate differentiation have been revealed (Seki S et al, Nature Genet, 2005). The purpose of this study is to construct and analyze the phenotype of CILP in vivo. Methods: CILP Tg was prepared by introducing the CILP gene (HA tag at the end of C) into the cartilage specific promoter (COL11 A2 promoter, IVS1). The Tg is used and the phenotype is analyzed. Results: CILP Tg was detected by PCR, mRNA was detected by real-time PCR, CILP protein was detected by HA antibody, N-terminal antibody and C-terminal antibody, CILP protein was detected by immunostaining. Analysis of the phenotype of CILP Tg, structure of intervertebral plate (nucleus, linear wheel), histological confirmation, staining of nuclear tissue, intentional reduction of Tg group. The lumbar intervertebral plate was evaluated by MRI, and its brightness was lower than that of the lumbar intervertebral plate. The height of the intervertebral disc on the lumbar spine is intentionally recognized. CILP Tg: Changes in the intervertebral disc, changes in the structure of the intervertebral disc, changes in the instability of the intervertebral disc, changes in the intervertebral disc, changes in the structure of the intervertebral disc, histological evaluation of the intervertebral disc after sex induction.

项目成果

Effect of small interference RNA (siRNA) for ADAMTS5 on intervertebral disc degeneration in the rabbit anular needle-puncture model.

• DOI: 10.1186/ar2851
• 发表时间: 2009
• 期刊: Arthritis research & therapy
• 影响因子: 4.9
• 作者: Seki S;Asanuma-Abe Y;Masuda K;Kawaguchi Y;Asanuma K;Muehleman C;Iwai A;Kimura T
• 通讯作者: Kimura T

Association study of COL9A2 with lumbar disc disease in the Japanese population

• DOI: 10.1007/s10038-006-0062-9
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: JOURNAL OF HUMAN GENETICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Seki, Shoji;Kawaguchi, Yoshiharu;Ikegawa, Shiro
• 通讯作者: Ikegawa, Shiro

Fatal prognosis of an atypical meningioma in the cervical spine.

颈椎非典型脑膜瘤的致命预后。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Orthop Sci. 13
• 作者: Kawaguchi Y;Ishihara H;Abe Y;Seki S;et.al.
• 通讯作者: et.al.

腰椎局所骨内および腸骨内におけるサイトカイン量の測定

腰椎和髂骨局部骨细胞因子水平的测量

• 发表时间: 2008
• 作者: 箭原康人;関庄二;川口善治;金森昌彦;阿部由美子;鈴木賀代;飯田充昭;木村友厚
• 通讯作者: 木村友厚

環軸関節固定術後14年で下位頚椎に障害をきたした関節リウマチの一例

寰枢椎关节融合术后14年类风湿性关节炎造成下颈椎损伤一例

• 发表时间: 2008
• 作者: 飯田充昭;川口善治;阿部由美子;関庄二;木村友厚
• 通讯作者: 木村友厚