新規ウイルスベクターによる視床・大脳新皮質局所神経回路の定量的解析

使用新型病毒载体对丘脑和新皮质局部神经回路进行定量分析

• 批准号: 18700341
• 负责人: 日置 寛之
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700341/
• 关键词: レンチウイルス; プロモーター; 神経細胞; 遺伝子導入; 特異性; 発現量; 定量化; GFP

本研究の最終目的は、局所神経回路網の解析に有用な新規ウイルスベクターを開発し、その後成体ラットを用いて視床・大脳新皮質局所神経回路の定量的解析を目指すものである。ウイルスベクターにはHIV-1由来のレンチウイルスを用い、逆行性経シナプストレーサーであるtetanus toxin c fragment(TTC)や順行性経シナプストレーサーである(WGA)を発現させる事で目的を達成する予定である。その為には神経細胞で特異的に働くプロモーターの開発が必須であるが、2007年は、レンチウイルスベクターで神経細胞特異的かつ高発現を可能にするプロモーターの開発を行い、国際学術誌にその成果を発表した(Hioki, et. al.,2007)。改変型プロモーターでは従来のプロモーターに比し、2〜4倍程度神経細胞での特異的発現が向上し、現在までに50件を超える問い合わせ・分与依頼があり、その有用性が他の研究者によっても認知されている。そこで申請者は、この改変型プロモーターを用い、上記経シナプストレーサータンパク(TTCもしくはWGA)を発現するウイルスベクターを作成し、成体ラット脳でその特性に関して詳細な解析を行った。ウイルス液を脳内に注入後、生存期間を1週間から2ケ月に渡ってトレーサータンパクの発現、そして経シナプス標識を検討したが、改変型プロモーターを用いた場合でも、トレーサータンパクの発現量が不足しているとの結論に至った。レンチウイルスは他のウイルスベクターに比し(AAVやAdenovirus)、目的タンパクの発現量が低い事が既に報告されている。次年度からは、さらに高発現を可能にするプロモーターの開発を行い、レンチウイルスにて検証を進めていく予定である。

This research aim の は bureau 経 back to god, road network analytical に の useful な new rules ウ イ ル ス ベ ク タ ー を open 発 し, そ の after adult ラ ッ ト を with い て depending on the bed, big 脳 neocortex bureau god 経 loop の quantitative analytic を refers す も の で あ る. ウ イ ル ス ベ ク タ ー に は HIV - 1 origin の レ ン チ ウ イ ル ス を い, retrograde 経 シ ナ プ ス ト レ ー サ ー で あ る tetanus toxin fragment c (TTC) や anterograde 経 シ ナ プ ス ト レ ー サ ー で あ る (WGA) を 発 now さ せ る matter で purpose を reach す る designated で あ る. そ の for に は god 経 cells で specific に 働 く プ ロ モ ー タ ー の open 発 が must で あ る が, 2007 は, レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー で god 経 cell specific か つ high 発 を now may に す る プ ロ モ ー タ ー の open 発 を い, international academic ambition に そ の results を 発 table し た (Hioki, et. Al., 2007). Change - type プ ロ モ ー タ ー で は 従 to の プ ロ モ ー タ ー に than し, degree of 2 ~ 4 times god 経 cells で の specific 発 が し upward, now ま で に 50 を super え る asked い close わ せ points and in accordance with the 頼 が あ り, そ の usefulness が he の researchers に よ っ て も cognitive さ れ て い る. そ こ で applicants は, こ の change - type プ ロ モ ー タ ー を い, written 経 シ ナ プ ス ト レ ー サ ー タ ン パ ク (TTC も し く は WGA) を 発 now す る ウ イ ル ス ベ ク タ ー を make し, adult ラ ッ ト 脳 で そ の features に masato し detailed analytical を な line っ て た. Liquid ウ イ ル ス を 脳 に within 1 week after injection, survival during を between か ら ケ 2 month に crossing っ て ト レ ー サ ー タ ン パ ク の 発 now, そ し て 経 シ ナ プ ス logo を beg し 検 た が, change - プ ロ モ ー タ ー を with い た occasions で も, ト レ ー サ ー タ ン パ ク の 発 is insufficient quantity が し て い る と の conclusion に to っ た. レ ン チ ウ イ ル ス は he の ウ イ ル ス ベ ク タ ー に than し (AAV や Adenovirus), purpose タ ン パ ク の 発 low amount now が い matter が に report both さ れ て い る. Annual か ら は, さ ら に high 発 を now may に す る プ ロ モ ー タ ー の open 発 を い, レ ン チ ウ イ ル ス に て 検 card を into め て い く designated で あ る.

项目成果

Expression of D1 but not D2 dopamine receptors in striatal neurons producing neurokinin B in rats

• DOI: 10.1111/j.1460-9568.2007.05923.x
• 发表时间: 2007-12
• 期刊: European Journal of Neuroscience
• 影响因子: 3.4
• 作者: T. Sonomura;KouichiC . Nakamura;T. Furuta;H. Hioki;A. Nishi;A. Yamanaka;M. Uemura;T. Kaneko

ラット中脳縫線核におけるグルタミン酸作動性ニューロンの解析

大鼠中脑中缝核谷氨酸能神经元的分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 日置寛之;中村悠;馬雲飛;中村公一;今野美知輝;早川隆;金子武嗣
• 通讯作者: 金子武嗣