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神経前駆細胞のエレベーター運動における微小管プラス端集積因子の役割

微管加端积累因子在神经祖细胞升降运动中的作用

基本信息

批准号：
18700340
负责人：
落合和
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research (2007)Nagoya University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700340/
关键词：
神経前駆細胞細胞周期エレベーター運動微小管ニューロン

项目摘要

胎生期の神経前駆細胞の細胞周期依存的な核移動(エレベーター運動)のメカニズムの一端を解明するために以下の研究を行った。細胞運動において重要な役割を果たしている微小管をその先端(+端)部で制御している分子として微小管集積因子(+TIPs)が知られており、神経前駆細胞のエレベーター運動における+TIPsの挙動を脳スライス培養系を用いてライブ観察を行った。+TIPsが蛍光タンパク質とともに発現するベクターを生体内マウスの胎生13.5日目のマウス脳室にインジェクションし、子宮内エレクトロポレーション法で神経前駆細胞の+TIPsラベリングを行い、翌日まで母体内で、遺伝子発現を待ち、脳スライスを作製し、神経前駆細胞のエレベーター運動の可視化を試みた。結果、エレクトロポレーションでは蛍光タンパク質が一カ所に集中して発現(散発性がない)し、隣接する細胞の蛍光の光が干渉し、一個の神経前駆細胞の+TIPsの動きを捉えるには共焦点顕微鏡(非所有)によるタイムラプス観察の必要性が生じた。そこで、子宮内の胎児脳室にポリエチレンイミン試薬を用いて発現ベクターをトランスフェクションすることで神経前駆細胞を散発的にラベリングすることで、非共焦点顕微鏡による観察におけるスライス培養のライブ観察を可能にすることができ、神経前駆細胞のG1からS期にかけての一つ局面で+TIPs特有のコメット状の動きを捉えることができた。さらに、この方法を用いて共焦点顕微鏡(共同研究)を用いた観察においても神経前駆細胞における+TIPsの挙動が捉えることができた。この方法は従来、用いられているエレクトロポレーションによる胎児への影響や発現ベクターの局所導入による人為的な変化を観察するような結果とは違い、毒性が低く、より生体内に近い状態で観察を行えていると考えられ、生体における分子イメージングにおいて非常に有用な手法である。

The study of cell cycle dependent nuclear movement in prenatal cells was carried out. Cell movement is important for the observation of microtubule aggregation factors (+TIPs) at the tip (+ end) of microtubule.+TIPs are used to detect cell movement in the culture system. TIPs can be detected in vivo at 13.5 days after birth, in utero at 13.5 days after birth. As a result, it is necessary to detect the concentration of light in a single area (dispersion), the interference of light in adjacent cells, the movement of +TIPs in a single pre-nervous cell, and the confocal microscope (non-ownership). The fetal compartment in the uterus is examined by a confocal microscope, and the fetal culture is examined by a confocal microscope. G1-S phase of neurons is a phase unique to TIPs. This method is based on confocal microscopy (co-study), which is used to detect the movement of neurons and TIPs. This method is very useful in detecting the effects of fetal diseases on human beings, such as those caused by the introduction of artificial diseases, and those caused by the introduction of artificial diseases.