血管平滑筋の異常収縮シグナル伝達の可視化による解明と創薬スクリーニング

通过血管平滑肌异常收缩信号传输的可视化进行阐明和药物发现筛选

• 批准号: 18700391
• 负责人: 川道 穂津美
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700391/
• 关键词: 生理学; 生体分子; タクパク質; プロテオーム; 循環器・高血圧; 蛋白質

蛋白発現・精製法、アクチンフィラメント-ミオシンの滑り速度測定法(in vitro motility assay)などの分子・細胞生物学的手法を駆使して、血管異常収縮(=Ca^<2+>非依存性のアクチンフィラメント-ミオシン滑り速度の増加)におけるシグナル分子の役割をリアルタイム可視化解析により検討した。具体的な実績は以下の通りである。(1)リコンビナント蛋白発現系(バキュロウイルス-昆虫細胞Sf9)を用いて、非常に困難とされているリコンビナント平滑筋ミオシンを活性のある形で発現、精製した。(2)血管の異常収縮のシグナル伝達系の鍵を握る分子であるROKでミオシンをリン酸化することに成功した。リン酸化は、SDS-PAGE電気泳動とProQ Diamond染色で確認した。(3)ROKでリン酸化された上記のミオシフンを用いて、ミオシンとアクチンとの滑り運動(=血管の異常収縮)をカルシウム非存在化で、リアルタイム可視化解析することに成功し、その速度解析を行った。この滑り運動が起きたことは、スキンド血管組織でカルシウム非存在化でのROKタンパク質投与時の収縮結果(JBC, 1997)を純粋なin vitro の系でも再現できたことを意味する。また、滑り運動速度はカルシウム依存性の正常収縮時の滑り運動速度とほぼ同じであった。これらの成果は、日本生物物理学会(2007年3月)、日本生理学会(2008年3月)で学会発表し、非常に高い評価を得た。よって、本研究課題は、順調に遂行された。なお、本研究は、山口大学組換えDNA実験安全委員会の承認および山口大学動物実験規則に基づく動物実験委員会の承認を得ている。

The method of protein detection, the method of measuring the speed of slippage (in vitro motility assay), the method of molecular cellular biology, the method of normal blood vessels (= Ca ^ & lt;2+&gt). Non-dependent equipment, speed, speed and speed. The specific information is listed below. (1) the protein system (insect cell Sf9) is very difficult to use. It is very difficult to make sure that the smooth muscle is active. (2) the blood vessels are normally characterized by molecular ROK, acidification, and success. Acidification, SDS-PAGE electrophoresis and ProQ Diamond staining were used to confirm the activity. (3) the ROK chemical acidification system is used to determine whether the device is successful, the speed analysis is successful, and the speed analysis is successful. The results (JBC, 1997) show that the in vitro has a negative impact on the occurrence of a negative response. The speed of rolling and sliding is the same as that of normal rolling. The Japanese Biophysics Society (March 2007), the Japan Physiology Society (March 2008), the Japanese physiological Society (March 2008), the Japanese Biophysics Society (March 2007) and the Japanese physiological Society (March 2008). The project of this study, the project of this study, and the project of this study have been completed. In this study, the DNA Safety Committee of Yamaguchi University acknowledges that the basic Sports Safety Committee of Yamaguchi University has recognized that the rules and regulations of Yamaguchi University.

项目成果

The involvement of cholesterol and membrane rafts in the signaltransduction of abnormal vascular smooth muscle contraction.

胆固醇和膜筏参与异常血管平滑肌收缩的信号转导。

• 发表时间: 2007
• 作者: F.Guo;et al.;小林誠;C.wang;C.wang;H. Kawamichi;S. Kobayashi;H. Kishi;D. Xu;K. Kajiya;郭鳳玲;加治屋勝子;川道徳津美;H. Kawamichi;小林誠;岸博子;Hiroko Kishi
• 通讯作者: Hiroko Kishi

Development of method to measure the serum concentration of sphingosylphosphorylcholine, an inducer of abnormal vascular contraction.

开发了测量异常血管收缩诱导剂鞘氨酰磷酸胆碱血清浓度的方法。

• 发表时间: 2007
• 期刊: The Journal of Physiological Sciences 57
• 作者: F.Guo;et al.;C.Wang et al.;S.Matsuo et al.;Y.Takada et al.
• 通讯作者: Y.Takada et al.

The screening for selective inhibitors of Rho-kinase-mediated Ca^2+sensitization of vascular smooth muscle (VSM) contraction

Rho激酶介导的血管平滑肌（VSM）收缩Ca^2敏化选择性抑制剂的筛选

• 发表时间: 2008
• 作者: F.Guo;et al.;小林誠;C.wang
• 通讯作者: C.wang

血管平滑筋のカルシウム非依存性収縮におけるFynテロシンキナーゼの重要性

Fyn 酪氨酸激酶在血管平滑肌钙依赖性收缩中的重要性

• 发表时间: 2007
• 作者: F.Guo;et al.;小林誠;C.wang;C.wang;H. Kawamichi;S. Kobayashi;H. Kishi;D. Xu;K. Kajiya;郭鳳玲
• 通讯作者: 郭鳳玲

Involvement of Fyn tyrosine kinase in actin stress fiber formation in fibroblasts

• DOI: 10.1016/j.febslet.2007.10.010
• 发表时间: 2007-11-13
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Xu, Dan;Kishi, Hiroko;Kobayashi, Sei
• 通讯作者: Kobayashi, Sei