枯草菌ゲノムベクター(BGMベクター)への効果的なクローニング技術の開発

枯草芽孢杆菌基因组载体（BGM载体）有效克隆技术的开发

• 批准号: 18710172
• 负责人: 金子 真也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710172/
• 关键词: 枯草菌; ゲノムベクター; BGM; BAC; cIカセット; cIリプレッサー遺伝子; ターゲットクローニング; バックグラウンド

真核生物のゲノムを用いたBGMベクターへの直接的なターゲットクローニングを行うに当たってゲノムサイズが比較的小さいシイタケゲノム(約40Mb)を対象とし、ゲノム中に数百コピー存在するLTR(Long Terminal Repeat)領域、約400bpを組み込むための足場として利用した。マーカーであるcIカセット(cI-spc)を挟むようにして2つのLTRを同方向に組み込んだBGMベクターを構築し形質転換を試みた。この結果幾つかのコロニーは得られたものの残念ながら目的とするシイタケゲノムを組み込んだ株は今のところ得られていない。原因としてLTR領域同士で組み換えが起こり欠してしまった可能性と、用いたゲノム自体に多くのダメージが入っていた可能性が考えられる。この点を改良すべく、ゲノムの精製法を改良する必要があり、また組み換えが起っても欠失しない(逆位となるように)2つのLTRを逆向きに組み込んだBGMベクターを作製する必要がある。これらに関して現在も引き続き調整中であり、また他の足場として交配決定遺伝子座(MATA座、約10kb)の領域についでも随意調整中であるが、残念ながら平成19年度中に良好な結果は得られなかった。しかしながら2年間の本研究を通じて2つのcIカセット(cI-spcとcI-BSを用いた形質転換で198kbと220kbのマウスゲノムを含む2つBACクローンを一度に組み込むことができ、さらにこれらを連結させ、355kbに及ぶJmjゲノム領域を再構築できた事は効果的なクローニング技術開発の一環として-定の成果であると考えられ、現在学術論文として投稿準備中であるとともにBGMベクターの多様なクローニング技術の開発について今後とも進展が期待される。

Eukaryotes のゲノムを Use いたBGM ベクターへのdirectなターゲットクローニングを行うに道たってゲノムサイThe relatively small さいシイタケゲノム(approximately 40Mb)を対肖とし, ゲノム中にhundreds of コピーexisting するLTR(Long Terminal Repeat) field, about 400bp is used in the field.マーカーであるcIカセット(cI-spc)を抟むようにして2つのLTR is the same direction as the group and the BGM is the same as the group and the structure is the same.この Result a few つかのコロニーは got られたものの愿ながらpurpose とするシイタケゲノムをgroup み込んだ息本のところget られていない. The reason is that the group of colleagues in the LTR field has changed and the possibility of changing the situation is not the same. , Use the possibility of using the self-made multi-function test.このPointをimprovingすべく、ゲノムのrefining methodをimprovingするnecessaryがあり、またgroupみchangeえが开っても无用しない(Reverse position となるように) 2つのLTR をReverse きに组み込んだBGM ベクターを出款するNecessary がある. The これらに关して is currently being adjusted and the であり and the またhis foot field として are mated and determined. The remaining seat (MATA seat, about 10 Kb)'s field is free to adjust the middle one, and the residual one is the best one in 2009.しかしながら2 years of this researchを通じて2つのcIカセット(cI-spcとcI-BSをreplaced with いたmorphosis転で198kbと2 20kbのマウスゲノムを窀2つBACクローンを一度に组み込むことができ、さらにこれらをLinkさせ、355kbにandぶJmjゲノムをReconstruction of the できた事は effect of the なクローニングtechnology 开発の一cyclic として-determined results であると考えられ、Now academic The paper is being prepared for submissionであるとともにBGMベクターの多様なWe are looking forward to the progress of our technology in the future.