亜鉛フィンガータンパク質間相互作用に基づく新規転写促進分子の創製

基于锌指蛋白-蛋白质相互作用创建新型转录促进分子

• 批准号: 18710183
• 负责人: 今西 未来
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710183/
• 关键词: DNA結合ドメイン; 亜鉛フィンガータンパク質; タンパク質間相互作用

前年度の結果より、転写因子GATA-1、Sp1の亜鉛フィンガードメイン同士でタンパク質間相互作用が生じており、GATA-1亜鉛フィンガー存在下において、Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合能が上昇することが示唆された。そこで、Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合能の上昇に寄与するGATA-1領域に関して検討を行った。GATA-1亜鉛フィンガードメインの欠失変異体および、DNA結合能の上昇を顕著に検出することのできる、Sp1亜鉛フィンガードメインを直列に連結した6-亜鉛フィンガータンパク質、Sp1ZF6を大腸菌発現系を用いて調製した。EMSAによりDNA結合能を調べた結果、GATA-1(208-304)、GATA-1(229-304)では、Sp1ZF6のDNA結合親和性の上昇が生じたが、GATA-1のC末端側の亜鉛フィンガーのみでは、その効果は認められなかった。Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合親和性の上昇には、GATA-1のC末端側の亜鉛フィンガー領域に加えて、N-Cフィンガー間のリンカー領域が必要であり、この領域がSp1のDNA結合活性の向上を導くのに重要であることが示唆された。また、細胞内で人工転写因子として亜鉛フィンガーを利用できることも確認した。タンパク質間相互作用を利用することによって、より効果的な転写調節が期待される。天然においては、GATAファミリーは様々な転写因子と相互作用することが知られている。したがって、得られた知見は、亜鉛フィンガードメインのタンパク質間相互作用の理解に向けても、有用な情報を提供するものと考えられる。

Results before the annual の よ り, planning to write factor GATA - 1, Sp1 の 亜 lead フ ィ ン ガ ー ド メ イ ン with "で タ ン パ ク が interaction between qualitative じ て お り, 亜 GATA - 1 lead フ ィ ン ガ ー presence に お い て, Sp1 亜 lead フ ィ ン ガ ー の DNA binding energy rising が す る こ と が in stopping さ れ た. そ こ で, Sp1 亜 lead フ ィ ン ガ ー の DNA binding energy rising の に send す る GATA - 1 field に masato し て 検 line for を っ た. GATA - 1 亜 lead フ ィ ン ガ ー ド メ イ ン の owe lost - variant お よ び, DNA binding energy rising の を 顕 the に 検 out す る こ と の で き る, Sp1 亜 lead フ ィ ン ガ ー ド メ イ ン を inline に link し た 6 - 亜 lead フ ィ ン ガ ー タ ン パ ク qualitative, Sp1ZF6 を coliform 発 practice while department を い て modulation し た. EMSA に よ り DNA binding energy を adjustable べ た results, GATA - 1 (208-304), 1 (229-304) GATA - で は, Sp1ZF6 の DNA binding affinity の rise が raw じ た が, の GATA - 1 C terminal side の 亜 lead フ ィ ン ガ ー の み で は, そ の unseen fruit は recognize め ら れ な か っ た. Sp1 亜 lead フ ィ ン ガ ー の DNA binding affinity の rise に は, の GATA - 1 C terminal side の 亜 lead フ ィ ン ガ に ー field plus え て, N - C フ ィ ン ガ ー between の リ ン カ ー field が necessary で あ り, こ の field が Sp1 の DNA binding activity の upward を guide く の に important で あ る こ と が in stopping さ れ た. ま た, で artificial planning to write in the cell factor と し て 亜 lead フ ィ ン ガ ー を using で き る こ と も confirm し た. タ ン パ ク を interaction between using す る こ と に よ っ て, よ り unseen fruited な planning write adjust が expect さ れ る. Natural に お い て は, GATA フ ァ ミ リ ー は others 々 な planning write factor と interaction す る こ と が know ら れ て い る. し た が っ て, ら れ た knowledge は, 亜 lead フ ィ ン ガ ー ド メ イ ン の タ ン パ ク の interaction between qualitative understanding to け に て も, providing useful な intelligence を す る も の と exam え ら れ る.

项目成果

転写因子Sp1、GATA-1亜鉛フィンガードメイン間の相互作用とDNA結合

转录因子 Sp1 和 GATA-1 锌指结构域之间的相互作用和 DNA 结合

• 发表时间: 2008
• 作者: 今西未来;東知佳;閻薇;二木史朗;杉浦幸雄
• 通讯作者: 杉浦幸雄

α-Helical Linker of an Artificial 6-Zinc Finger Peptide Contributes to Selective DNA Binding to a Discontinuous Recognition Sequence

人工 6-锌指肽的 α-螺旋接头有助于选择性 DNA 结合不连续识别序列

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochemistry 46
• 作者: Wei Yan;Miki Imanishi;Shiroh Futaki;Yukio Sugiura
• 通讯作者: Yukio Sugiura

遺伝子制御に向けたマルチ亜鉛フィンガータンパク質の創製

创建用于基因调控的多锌指蛋白

• 发表时间: 2007
• 作者: 今西未来;東知佳;閻薇;二木史朗;杉浦幸雄;今西未来
• 通讯作者: 今西未来

Linker design of multiple zinc finger peptides: flexible, polycationic, and metal-binding looped linkers

多个锌指肽的接头设计：柔性、聚阳离子和金属结合环状接头

• 发表时间: 2007
• 作者: Miki IMANISHI;Wei YAN;Shiroh FUTAKI;Yukio SUGIURA
• 通讯作者: Yukio SUGIURA