発光性希土類錯体の協同的形成を利用した高選択的遺伝子解析法

利用协同形成发光稀土配合物的高选择性基因分析方法

• 批准号: 18759004
• 负责人: 北村 裕介
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Chuo University (2007)Kumamoto University (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18759004/
• 关键词: DNAコンジュゲート; SNP; ハイブリダイゼーションプローブ; 協同性; 希土類金属錯体; 時間分解発光スペクトル測定; 比色分析; UV融解実験

プローブが協同的に形成する希土類金属イオンの発光に適した配位場に着目し、簡便なSNP解析法の開発を試みた。現在までに2種のプローブ、即ちEDTAとフェナンスロリン(phen)を末端に導入したDNAプローブ(金属捕捉プローブ、光増感プローブ)の協同的ハイブリダイゼーションを利用し、ターゲットDNA上の点変異の検出に成功している(両者がターゲットに結合した際、その修飾部位は互いに隣接するように設計されており、金属の配位場がそこで初めて形成される設計になっている)。しかし、同検出系においてTb^<3+>イオンを用いた際の発光量子収率が3.3%、Eu^<3+>イオンで1.5%とさほど高い値ではなかった。そこで超微量分析に対応するためにも量子収率の向上に向けてより発光効率の良い光増感剤の探索を行った。その最低三重項エネルギー状態から、より良い光増感剤として機能すると考えたテトラアザトリフェニレン(tatp)並びにグルタミン酸-トリプトファンコンジュゲートを導入した新規光増感プローブの合成を行った。これらを用い、発光量子収率を求めようとしたが、予想と反し発光強度は極めて小さかった。一般的に用いられているプローブの標的DNAへの結合安定性とその塩基配列特異性は表裏一体であり、結合安定性を向上させるためにプローブのODN部位を長くすると塩基選択性が低下する。そこで本検出法では、発光には効果的なミクロな場の形成が重要であるため、ミスマッチ塩基対部位を含むDNAに結合してもそのミスマッチ塩基対の存在でミクロな場が乱されるような系の構築に向けた検討を行った。つまり、プローブ長を伸ばし、相補的なDNAへの熱安定性を確保しながら、点変異を含むDNAとの差別化をできる可能性がある。実際、様々な位置にミスマッチ塩基対を導入しその発光強度を測定した結果、光増感剤の導入部根元にミスマッチが存在する場合、プローブが結合していても、その発光強度はフルマッチの場合と比較して、小さくなる事が判った(最大7分の1)。

In conjunction with the formation of rare earth metals, the coordination system is focused on, and the SNP analytical method is used to test. There are two kinds of equipment, that is, the EDTA device (phen), which is loaded into the DNA device (metal capture sensor, photosensitive sensor) at the end of the DNA (metal capture sensor, photosensitive sensor). The trimming parts are connected to each other, and the metal coordination device is used to form the device design device. The optical quantum rate of 3.3% and 1.5% of the optical quantum rate of 3.3%, 1.5% and 1.5% respectively in the same system, such as TB ^ & lt;3+>, which is the same as that of the system. Ultramicroanalysis is the best way to explore the quantum rate of light. To improve the performance of the system and improve the performance of the photosensitive system, the system can improve the performance of the system (tatp) and improve the performance of the system. In this paper, we use the light quantum rate to calculate the light intensity, and we want to change the light intensity. The general information system is based on the combination of DNA and stability information, which is integrated in the list of characteristics, and the combination of stability and stability is used to select the long-term performance of the ODN. In this paper, the method is used, and the results show that the important information is caused by the combination of the DNA and the data. There is a difference between the two parts of the system. You can make sure that the DNA is stable, and that you can make sure that you are different from each other. You can make sure that there is a difference between the DNA and the possibility. The results of the measurement of light intensity, the results of light intensity measurement, the results of light intensity measurement and the results of light intensity measurement.

项目成果

Colorimetric allele typing through cooperative binding of DNA probes carrying a metal chelator for luminescent lanthanide ions.

• DOI: 10.1016/j.ab.2006.09.009
• 发表时间: 2006-12
• 期刊: Analytical biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Yusuke Kitamura;T. Ihara;Y. Tsujimura;Yuka Osawa;M. Tazaki;A. Jyo

光学活性ルテニウム錯体-DNA コンジュゲートのタンデム二本鎖形成に見られる非対称な協同性

光学活性钌配合物-DNA 缀合物串联双链体形成中观察到的不对称协同作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Yusuke Kitamura;Toshihiro Ihara;Yusuke Tsujimura;Yuka Osawa;Akinori Jyo;富森 岳・北村裕介・井原敏博・城 昭典・千喜良 誠;北村裕介・井原敏博・城 昭典・千喜良 誠
• 通讯作者: 北村裕介・井原敏博・城 昭典・千喜良 誠

Colorimetric Allele Analysis Based on the DNA-directed Cooperative Formation of Luminous Lanthanide Complexes

基于 DNA 指导协同形成发光稀土配合物的比色等位基因分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Nucleic Acids Symposium Series 50
• 作者: Pelin Arslan;Toshihiro Ihara;Yusuke Kitamura;Yusuke Kitamura
• 通讯作者: Yusuke Kitamura

Metal ion-directed cooperative DNA binding of small molecules

• DOI: 10.1016/j.jinorgbio.2006.06.008
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: JOURNAL OF INORGANIC BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 3.9
• 作者: Ihara, Toshihiro;Ikegami, Takashi;Jyo, Akinori
• 通讯作者: Jyo, Akinori

金属配位子-DNA コンジュゲートの協同的ハイブリダイゼーションを利用した遺伝子の蛍光検出

使用金属配体-DNA 缀合物协同杂交进行基因荧光检测

• 发表时间: 2008
• 作者: Yusuke Kitamura;Toshihiro Ihara;Yusuke Tsujimura;Yuka Osawa;Akinori Jyo;富森 岳・北村裕介・井原敏博・城 昭典・千喜良 誠
• 通讯作者: 富森 岳・北村裕介・井原敏博・城 昭典・千喜良 誠