歯牙発生におけるAldh1a2の機能解析

Aldh1a2在牙齿发育中的功能分析

• 批准号: 18890198
• 负责人: 佐々木 穂高
• 金额: $ 1.39万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890198/
• 关键词: Aldhla2; 歯髄; 歯牙発生; 発生

(1)局在の検索:ICRマウス(5週齢)下顎切歯を含む顎骨を、タングステンナイフを用い川本法にて凍結非脱灰標本を作製した。一次抗体;Anti-Aldhla2 antibody(Santa Cruz)1:50、二次抗体;Alexa488標識anti-IgG(MolecularProbe)1:100にて免疫蛍光染色を行い、万能写真顕微鏡(UPM)にて観察した。発現は、歯胚側末端部の歯髄に限局して認められ、歯髄の分化に伴い減少し、象牙芽細胞への分化や硬組織形成以前に消失していった。又、ヒットしたマイクロアレイプローブを参照して、ISH用プローブを作成し、臼歯歯胚(E16〜P3)のAldhla2の局在検索を行ったところ、胎生期(E16、E18)における歯乳頭内に発現が認められた。(2)発現の定量的検索下顎切歯より採取した歯髄を未分化側より(1)歯胚側(2)中間側(3)切端側と分割し、定量的リアルタイムPCR法とWestern Blotting法を用いて経時的な定量的発現変化を検索した。定量的リアルタイムPCR法は、Trizolを用いてtotal RNAを採取しTaqman[○!R] probe(Aldhla2;m0050136)、内因性コントロールにGAPDHを用いてABIPrism7700にて行った。ΔCT法解析により切端側を基準=1とした場合、歯胚側は中間側の約30倍の発現を示した。Western Blotting法は、一次抗体;Anti-Aldhla2 antibody 1:100、二次抗体;Polyclonal Rabbit Anti-goat immunoglobulin/HRC(DAKO)1:100を私用した。発現バンドは、歯胚側から徐々に減少し切端側では消失した。(3)歯髄細胞の培養下顎切歯より採取した歯髄組織を30mm dishに播種しα-MEMにて培養した。14日間培養したものを4%パラホルムアルデヒドにて5分間浸漬固定し(1)の条件で免疫蛍光染色を行った。細胞増殖が強く密になっている部位では、細胞質内に強発現が認められた。又、qRT-PCR法では、歯胚側培養細胞に切端側と比較して約1.8倍の発現が認められた。

(1)The current search:ICRス(5 weeks old) mandibular incisors are made with frozen non-deliming plum pulp using the Nakagawa method, including the jaw bone and the Tainingンイ. Primary antibody;Anti-Aldhla2 antibody(Santa Cruz)1:50, secondary antibody;Alexa488 identification anti-IgG(Molecular Probe)1:100, immunostaining, Universal Photo Microscope (UPM) detection. The development of tooth bud is limited to the development of tooth bud, tooth bud differentiation is accompanied by a decrease in tooth bud differentiation and disappearance of tooth bud before hard tissue formation. In addition, the development of dental papilla, dental embryo (E16 ~ P3) and Aldhla2 in the fetal period (E16, E18) and dental papilla is recognized. (2)The quantitative detection model of mandibular incision is used to detect the quantitative detection model of mandibular incision. The quantitative detection model of mandibular incision is used to detect the quantitative detection model of mandibular incision. The quantitative PCR method is used to detect the total RNA in Trizol. R] probe(Aldhla2;m0050136), intrinsic mutation and GAPDH are used in ABIPrism7700.ΔCT method analysis shows that when the reference value of the cutting end side is equal to 1, the occurrence of the cutting end side is about 30 times that of the middle side. Western Blotting, primary antibody;Anti-Aldhla2 antibody 1:100, secondary antibody;Polyclonal Rabbit Anti-goat immunoglobulin/HRC(DAKO)1:100, private use. The appearance of the virus is reduced from the embryonic side to the distal side. (3)Cultured mandibular incisors were seeded on a 30mm dish with α-MEM. 14 days of incubation, 4% of the time, 5 minutes of immersion fixation, and immunostaining. Cell proliferation is strong and dense. The site is opposite to the cytoplasm. In addition, qRT-PCR method was used to detect about 1.8-fold increase in the number of embryos cultured in vitro.

项目成果

出生前後でマウス歯乳頭において発現減少をきたす遺伝子の検索

寻找出生前后小鼠牙乳头表达降低的基因

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐々木 穂高;村松 敬;正岡 孝康;榎谷 保信;橋本 貞充;鄭 翰聖;下野 正基
• 通讯作者: 下野 正基