高病原性マウスレトロウイルス感染様式の解明

高致病性鼠逆转录病毒感染模式的阐明

• 批准号: 18890240
• 负责人: 渡邊 理恵
• 金额: $ 1.06万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890240/
• 关键词: マウス白血病ウイルス; 病原性; エンベロープ; 感染経路; カルシウムイオン

マウス白血病ウイルス(WLV)の中には、レトロウイルス共通の「受容体結合→細胞侵入」という感染経路を取らないウイルスが存在する。このウイルスは高病原性MLV(P-MLV)であり、受容体へ結合した後、外来性の可溶性エンベロープ表面領域(soSU)が存在して初めて感染可能である。この感染経路はレトロウイルスの"non-classical侵入経路"と呼ばれ、P-MLVの他にもT細胞指向性猫白血病ウイルス(FeLV-T)がこの経路を使用する。こうした背景からnon-classical経路と病原性発現との相関性が示唆されて来たが、決定的な証拠は得られていない。本研究では未だ不明な分子メカニズムを解明することによって、P-MLVの病原性発現の決め手にアプローチすることが目的である。本研究では、「P-MLVはエンベロープ(Env)の活性化に必須であるカルシウムイオン(Ca^<2+>)の保持能力を欠損しており、そこへsoSUが近付くことでCa^<2+>を提供し、Envの活性化が可能となる」という仮説について検討を行う。本年度は、レトロウイルス粒子作製系の立ち上げと、組換えsoSUタンパクの作製を行った。同種指向性MLV(E-MLV)のEnvは、1アミノ酸の置換、欠損により、non-classical経路を取らせることができるため、E-MLVのEnvをベースとして、41番目のヒスチジンを欠損(delH)、あるいはアラニンへ置換(41A)した変異Env発現プラスミドを構築した。次に変異ウイルスの感染rescue、Ca^<2+>保持能力の検討に使用する精製soSUを大量に得るため、soSU発現組換バキュロウイルスを作製した。delH EnvのsoSUは、上清中への分泌が見られず、可溶性蛋白質として回収できなかったが、その他(WT,41A)のEnvについてsoSUを精製蛋白質として得ることができた。これらの材料を用いて、今後、予定通りにウイルスのrescue試験、Ca^<2+>保持能力試験を通して、高病原性MLVの"non-classical侵入経路"の分子メカニズムの解明を目指したい。

In leukemia cell (WLV), there is a common "receptor binding → cell invasion" and "infection pathway". High pathogenicity MLV(P-MLV), receptor binding, exogenous soluble MLV surface domain (soSU), and early infection possibility. The "non-classical invasive pathway" of the infection pathway is called P-MLV and other T-cell directed feline leukemia pathways (FeLV-T) are used in this pathway. The correlation between non-classical pathways and pathogenicity development is shown in the following ways: The aim of this study is to elucidate the molecular mechanism for the pathogenesis of P-MLV. In this study,"P-MLV is required to activate Env (Ca^<2+>) and its ability to retain Ca^<2+> is insufficient." This year, the particle production system was established and replaced. Env of isotropism MLV(E-MLV): 1. Substitution of acid, loss, non-classical circuit, 41. Substitution of acid, loss, non-classical circuit, loss (delH), loss (41A), loss (41B), loss (41A), loss (41A), loss (41B), loss (41A), loss (41B), loss (41A), loss (41A), loss (41B), loss (41A), loss (41 Second, the infection rescue and Ca^<2+> retention ability of different species are discussed. The use of refined soSU to obtain a large number of species is controlled. DelH Env soSU, supernatant secretion is seen, soluble protein is recovered, and other (WT, 41A) Env soSU is refined protein. In the future, it is expected to pass the rescue test, Ca^<2+> retention test, and the molecular analysis of the "non-classical invasion pathway" of highly pathogenic MLV.