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Engineering expression of mercury transporter MerC and SNARE in Arabidopsos thaliana for phytoremediation of mercury

汞转运蛋白 MerC 和 SNARE 在拟南芥中的工程表达用于汞的植物修复

基本信息

批准号：
19510094
负责人：
KIYONO Masako
金额：
$ 3万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、毒性が軽減された形の重金属を植物に高蓄積させるための新規バイオエンジニアリングを施すことにより、汚染地域の浄化と重金属のリサイクルを目指した次世代型低負荷環境修復技術を確立することを目的とした。トランスジェニック植物の作出に際しては、(1)細菌由来の重金属トランスポーター(MerC)の植物細胞膜局在化及び重金属輸送能の付与、(2) MerCの植物解毒器官である液胞膜局在化及び重金属液胞隔離(高蓄積)能の付与という二段階構想をもっている。細菌由来のMerCは無機水銀、カドミウムを細胞外から細胞内へ輸送するトランスポーターである。また、シロイヌナズナ由来のSNAREファミリーのSYP121 は細胞膜に、AtVAM3は液胞膜に特異的に局在する一回膜貫通型の膜タンパク質である。本研究では、MerCを細胞膜や液胞膜へ効率的に輸送させるために、輸送制御タグとしてSYP121またはAtVam3 を融合したmerC-SYP121、merC-AtVAM3融合遺伝子を作成し、植物ベクターpMAT137に組換え、常法に従いシロイヌナズナに形質転換した。次に作成した遺伝子組換え植物を用いて、ゲノムPCRにより目的遺伝子のゲノムへの組換え、RT-PCRにより目的遺伝子の発現をmRNA レベルでそれぞれ確認した。さらに遺伝子組換え植物体の水銀耐性および蓄積性について検討した結果、merC-SYP121、merC-AtVAM3 遺伝子組換えシロイヌナズナにおいて、水銀耐性は野生株とそれぞれほぼ同程度であったが、水銀蓄積性は野生株に比べそれぞれ有意に上昇した。以上の結果より、merC-SYP121、merC-AtVAM3遺伝子組換え植物体は、水銀耐性を低下することなく水銀高蓄積性を示し、水銀浄化に適していると考えられた

This study aims to establish a new method for reducing the toxicity of heavy metals in plants and to establish a new low-load environmental remediation technology for contaminated areas. (1) The accumulation of heavy metals from bacteria in plant cell membrane and the contribution of heavy metal transport energy;(2) The accumulation of heavy metals in plant cell membrane and the contribution of heavy metal cell isolation (high accumulation) energy in plant detoxification organs of MerC. The origin of mercuric acid is inorganic mercury, and its transport is extracellular and intracellular. SYP121 is a membrane, AtVAM3 is a membrane specific, and the membrane is a membrane penetrating type. In this study, merC-SYP-121 and merC-AtVAM-3 fusion genes were synthesized and transformed into merC-SYP-121 and merC-AtVAM-3 fusion genes. The next step is to create a gene expression vector for plants, to use PCR to identify the gene expression vector, and to use RT-PCR to identify the gene expression vector. The results showed that merC-SYP121, merC-AtVAM3 and merC-SYP121 had higher mercury tolerance than wild plants and higher mercury accumulation than wild plants. The above results show that merC-SYP121, merC-AtVAM3 gene sub-groups change, plant body, mercury tolerance is low, mercury accumulation is high, mercury degradation is suitable for the study.