Elucidation of Molecular basis of inherited and acquired protein S deficiency as a thrombosis risk factor

阐明遗传性​​和获得性蛋白质 S 缺乏作为血栓形成危险因素的分子基础

• 批准号: 19590553
• 负责人: KOJIMA Tetsuhito
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590553/
• 关键词: プロテインS(PS)欠損症; PROS1遺伝子; 遺伝子欠失; プロモーター; ルシフェラーゼ・レポーター解析; HepG2細胞; エストラディオール(E2); PS mRNA

先天性プロテインS(PS)欠損症・異常症の遺伝子解析において、未解析の新たな症例検体については従来のPCRダイレクトシーケンス法を用いた遺伝子変異の同定を行った結果、新規変異を含めてその原因と思われるPROS1遺伝子変異を同定した。その中でPROS1遺伝子の蛋白翻訳領域には変異は見つからなかったものの、翻訳開始点より168bp上流のプロモーター領域に同定したC→T (c.-168C>T)の点突然変異のルシフェラーゼ・レポーター解析の結果、変異型では転写活性が20%まで低下し、先天性PS欠損症の原因と思われた。先天性PS欠損症症例で従来の各エクソンのPCRダイレクトシーケンス法にてPROS1遺伝子に変異の見つからなかった症例において、PROS1遺伝子の15個の各エクソン部に偽遺伝子と区別するPCRプライマーを設定し、Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) 法によってPROS1遺伝子欠失の同定解析を行ったところ、PROS1遺伝子の全欠失を示す症例を1例同定した。しかし、他の多くの症例では欠失を同定できず、遺伝子欠失の頻度はまれであると思われた。ヒトPSを産生するHepG2 細胞を用い、エストラディオール(E2)の添加による培養上清中のPS分泌量の変動についてELISA 解析を行ったところ、30%の発現低下を認めた。また、細胞内PS mRNAの変動についてReal Time PCRを用いて定量した結果、同様にE2 の添加によるmRNA発現低下を認めた。現在、PS遺伝子プロモータ領域をクローニングし、ルシフェラーゼ・レポーター解析による、HepG2細胞でのE2 によるPS遺伝子発現の制御動態解析を施行中である。

The genetic analysis of congenital disorders and abnormalities is carried out in the presence of new, unresolved, and unsolved cases. The PCR results are consistent with the results of the new, unresolved, and unsolved cases. PROS1 gene protein translation domain is different, the translation start point is 168bp, the upstream protein translation domain is the same as C→T (c.- 168C>T) point suddenly changed the results of the analysis, abnormal writing activity up to 20% lower, congenital PS deficiency and thinking about the cause PCR amplification for each component of the PROS1 gene in congenital PS deficiency syndrome cases, PCR amplification for each component of the PROS1 gene in 15 components of the PROS1 gene, Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) for identification of PROS1 gene deficiency syndrome cases, and PCR amplification for identification of PROS1 gene deficiency syndrome cases. PROS1 is a complete failure to show symptoms. There are many cases of missing children, and the frequency of missing children is different. The production of PS in HepG2 cells was detected by ELISA analysis, and 30% of PS secretion was detected by ELISA analysis. Real Time PCR was used to quantify PS mRNA activity in cells, and E2 was added to mRNA expression. At present, PS gene expression domain analysis, HepG2 cell E2 analysis of PS gene expression control dynamics is in progress.

项目成果

Wilms' tumor 1 message and protein expression in bone marrow failuresyndrome and acute leukemia.

骨髓衰竭综合征和急性白血病中维尔姆斯肿瘤 1 的信息和蛋白表达。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Pathol Int. 57
• 作者: Iwasaki T;et. al.
• 通讯作者: et. al.

An Sp1 binding site mutation of the PROS1 promoter in a patient with protein S deficiency

蛋白 S 缺乏症患者 PROS1 启动子的 Sp1 结合位点突变

• 发表时间: 2007
• 期刊: Br J Haematol 138(5)
• 作者: N Sanda;Y Fujimori;T Kashiwagi;A Takagi;T Murate;E Mizutani;T Matsushita;T Naoe;T Kojima
• 通讯作者: T Kojima

Molecular basis of antithrombin deficiency in four Japanese patients with antithrombin gene abnormalities including two novel mutations.

四名抗凝血酶基因异常（包括两种新突变）日本患者抗凝血酶缺乏的分子基础。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Am J Hemato1 82
• 作者: M. Kyotani;T. Kojima;et. al.
• 通讯作者: et. al.

RET signaling-induced SPHKl gene expression plays a role in both GDNF-induced differentiation and MEN2-type oncogenesis

RET信号传导诱导的SPHK1基因表达在GDNF诱导的分化和MEN2型肿瘤发生中发挥作用

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Neurochem 102
• 作者: M. Murakami;T. Kojima;et. al.
• 通讯作者: et. al.

An Sp1 binding site mutation of the PROSl promoter in a patient with protein S deficiency.

蛋白S缺陷患者中PROS1启动子的Sp1结合位点突变。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Br J Haematol 138
• 作者: N. Sanda;T. Kojima;et. al.
• 通讯作者: et. al.