ラット変性網膜へのレンチウイルスベクターを用いたHGF遺伝子導入の効果

慢病毒载体将HGF基因导入大鼠退化视网膜的效果

• 批准号: 19791285
• 负责人: 藤原 貴光
• 金额: $ 1.78万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791285/
• 关键词: HGF; 遺伝子導入; 網膜色素変性; RCSラット; 視細胞変性; レンチウイルスベクター

本研究ではhepatocyte growth factor (HGF)の発現遺伝子をウイルスベクターによって、遺伝性網膜変性ラット視細胞および網膜色素上皮に導入し、その効果と副作用を検討することを目的とする。平成19年度には下記の検討を行った。方法:1.段階希釈法で測定および判定し、ゲルバー法でレンチウイルスベクターの力価を求めた。2.レンチウイルスベクターの切断パターンテスト。レンチウイルスベクターのDNAを抽出し、アガロースゲル電気泳動を行った。このDNA切断パターンを初代ウイルスの切断パターンと比較した。3.外来遺伝子としてGFPを組み込んだレンチウイルスベクターをRCSラットの右眼の網膜下腔に注入した。左眼の網膜下腔にはレンチウイルスベクターのみを注入した。4.網膜組織標本を作製し、GFPの発現を光学顕徴鏡で確認した。5.HGFのcDNAを搭載したレンチウイルスベクターを3週齢のRCSラットの片眼の網膜下に注入した。結果:精製したレンチウイルスベクターに欠失ウイルスは生じていなかった。ラットの網膜へのウイルスベクター注入では、網膜色素上皮細胞においてGFPの発現を確認でき、レンチウイルスベクターを用いてラットの網膜色素上皮細胞に遺伝子導入が可能なことが判明した。現在の所、有意差は得られていないが、HGF遺伝子導入により、網膜外顆粒層の細胞核がコントロール群に比較して保たれている個体があり、組織学的な見地からはHGFは網膜変性細胞を保護する可能性があると思われた。今後の課題:遺伝子導入したRCSラットにおいて網膜電図を測定して、機能的に網膜変性ラットの網膜変性に対して網膜機能の保護効果あるかどうかについて検討を進める。また、今のところ遺伝子導入の際に、手技的の問題で白内障、網膜裂孔および硝子体出血が生じることがあり、手技的な安全性を高めていく。

The aim of this study was to investigate the effects and side effects of heptocyte growth factor (HGF) on retinal pigment epithelium and retinal sex factor receptor. In 2019, the Ministry of Foreign Affairs issued a report on the implementation of the plan. Methods:1. The method of segment classification is used to determine the strength of the sample. 2. The DNA of the virus is extracted and the DNA of the virus is extracted. The DNA cleavage process is very simple. 3. The foreign gene is injected into the right eye and lower retina. The left eye is injected into the subretinal cavity. 4. The retinal tissue was prepared and the appearance of GFP was confirmed by optical microscopy. 5. HGF cDNA was injected into the retina at the beginning of 3 weeks. Results: Refined and refined. It was confirmed that GFP expression in retinal pigment epithelial cells could be induced by gene injection into retinal pigment epithelial cells. Now, we have the possibility of introducing HGF gene into the nucleus of retina outer granular layer and comparing it with that of individuals. Histological findings show that HGF gene can protect retinal cells. Future issues: the introduction of genetic elements into RCS, the measurement of retinal current, the protection of retinal function, the investigation of retinal variation, and the improvement of retinal function. The problems of cataract, retinal hole and nitrate hemorrhage are high in the safety of hand technique.