メタンをメタノールに水酸化する生体触媒の活性安定化機構の解明

阐明将甲烷羟基化为甲醇的生物催化剂的活性稳定机制

• 批准号: 19860034
• 负责人: 宮地 輝光
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19860034/
• 关键词: メタン水酸化酵素; メタノール脱水素酵素; タンパク哲複合体形成

本研究課題では、(1)膜結合型メタン水酸化酵素(pMMO)と複合体を形成し、pMMOを安定化するタンパク質pMMO-Rの構造と機能を特定し、(2)pMMO-RによるpMMO活性安定化機構を明らかとすることをめざしている。平成19年度は、上記(1)を達成するため以下3つの実験を行った。(1)pMMO-Rの単離精製(2)質量分析法によるアミノ酸配列の決定(3)アミノ酸配列から推測されるタンパク質活性の測定。(1)pMMO-Rの単離精製:メタン酸化細菌を培養し、得られた菌体から各種カラムクロマトグラフィーを用いてpMMO-Rの単離精製を行った。ゲル濾過カラムおよび陰イオン交換カラムによる精製の諸条件を検討し、pMMO-Rを高純度に精製することに成功した。(2)質量分析法によるアミノ酸配列の決定:pMMO-Rのアミノ酸配列は、メタン酸化細菌由来のメタノール脱水素酵素(MDH)と同じであった。(3)タンパク質活性の測定:pMMO-RのMDH活性を確認するため、紫外可視吸光光度計を用いてメタノール酸化活性を測定した。その結果、pMMO-Rはメタノール酸化活性を示すことがわかった。以上の結果から、pMMO-Rは既知タンパク質であり、メタノール酸化活性を示すMDHであることがわかった。これまでに報告されているMDHの構造・機能に関する知見を加味して、MDHがpMMOと複合体を形成することで、如何にしてpMMO活性を安定化しているのかを明らかとすることが今後の課題である。

In this study, (1) membrane-bound water acidifying enzyme (pMMO) complex formation, pMMO stabilization, pMMO-R production, (2) pMMO-R activity stabilization, pMMO activity stabilization, and so on. In the year of Pingcheng (19), the previous one (1) has been completed in the following three years. (1) pMMO-R isolation (2) quantitative analysis method (3) Acid alignment determination (3) determination of activity. (1) pMMO-R isolation: the acidified bacteria are cultured, and all kinds of bacteria are used to isolate the sperm by pMMO-R. Please tell me that the conditions are correct, and that the pMMO-R is highly accurate and successful. (2) the determination of acid alignment by quantitative analysis: pMMO-R acid collocation, acidification bacteria, dehydrase enzyme (MDH) and acid acid bacteria. (3) the determination of the activity of pMMO-R, the activity of MDH, and the absorbance of ultraviolet visible light. The results showed that the acidizing activity of pMMO-R was significantly higher than that of the control. The results of the above results show that pMMO-R does not know that the acidizing activity and the acidizing activity of the MDH are different. In order to improve the quality of the report, the MDH machine can tell you that the flavor is added, that the MDH pMMO complex is formed, and that how to stabilize the pMMO activity will affect the future problem.