低酸素応答における細胞内酸素センサーの同定と解析

缺氧反应中细胞内氧传感器的识别与分析

• 批准号: 19890060
• 负责人: 中山 恒
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19890060/
• 关键词: 低酸素応答; プロリン水酸化; タンパク質; シグナル伝達; プロテオーム; 免疫沈降; 細胞培養; 質量分析

低酸素応答における低酸素コンプレックスの決定低酸素応答におけるシグナル伝達機構の解析を、プロリン水酸化酵素PHD3が形成する低酸素コンプレックスに着目して進めた。培養細胞にPHD3を外来的に発現させ、免疫沈降法によりPHD3コンプレックスを精製した。精製したコンプレックスを二次元電気泳動で展開し、質量分析法により構成タンパク質の決定を行った。一連の解析11回の試行で108のタンパク質スポットを決定した。これらのスポットの情報をデータベースと照合し、繰り返し得られるもの、異なるアプローチで同様に得られるものを指標として、三つの分子を主たる解析対象として絞り込んだ。これら三分子に関して遺伝子クローニングを行い、その発現とPHD3との結合を培養細胞の系で検証した。本研究で得られた成果の一部は、BMB2007学会(2007年12月 横浜)において発表した。酸素センシング機構に働くタンパク質生物の酸素センシング機構にはPHD3低酸素コンプレックスの形成が関与していることを仮説として、ゲル濾過法を用いて、低酸素コンプレックスを分子量ごとに分画した。質量分析により得られた候補タンパク質の発現をゲル濾過分画内で確認し、低酸素コンプレックス形成への関与を示した。

The determination of low acid content in the serum of low acid content in the serum of low acid PHD3 gene expression in cultured cells and purification by immunosedimentation A method for determining the quality of a sample by mass spectrometry 108 of the 11-loop trial analysis The information of the three molecules is divided into three parts: the first part is the information of the three molecules, the second part is the information of the three molecules, the third part is the information of the three molecules, the fourth part is the information of the three molecules, the information of the three molecules, the The three molecules involved in the development of PHD3 and PHD3 were identified in cultured cell lines. Part of the results of this study were published in the BMB2007 Society (December 2007). The mechanism of acid hydrolysis is related to the formation of low acid hydrolysis, and the molecular weight of low acid hydrolysis is determined. Quality analysis is used to determine the relationship between the quality of the candidate and the quality of the filter.