Regulation of tumor growth mediated by pyruvate dehydrogenase PDH

丙酮酸脱氢酶 PDH 介导的肿瘤生长调节

• 批准号: 21K06815
• 负责人: 中山 恒
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06815/
• 关键词: ピルビン酸脱水素酵素PDH; 代謝; 細胞増殖; 代謝制御; 腫瘍; 低酸素応答; がん; 遺伝子発現

本課題では、ピルビン酸脱水素酵素PDHのノックダウンにより腫瘍形成能が低下する分子機序を、代謝調節と遺伝子発現の両側面から明らかにすることをめざして、研究を進めた。前年度、樹立に成功したPDHE1a, PDHE1bのノックアウト細胞を、異なる乳がん細胞株(MCF7)および大腸がん細胞株(HCT116)についても作製し、それらの表現型を確認したところ、いずれも細胞増殖が抑制されていることが明らかになった。次に、これらの細胞に、ドキシサイクリン添加によりPDHの発現が誘導されるベクターを導入し、レスキュー実験を行った。PDHE1a, PDHE1bのそれぞれのレスキュー実験に関して、異なるドキシサイクリンの濃度条件を検討して、毒性を示さず、内在性遺伝子と同等の発現量が得られる濃度を決定した。この濃度でドキシサイクリンを添加したところ、各PDHの発現がレスキューされると共に、PDHを構成する他のサブユニットの発現も正常化することがウェスタンブロットにより明らかになった。さらに、同じドキシサイクリン誘導システムを用いて、ドキシサイクリン添加によりGFPの発現が誘導される乳がん細胞株を樹立した。この細胞をヌードマウスに移植し、ドキシサイクリン添加の有り無しで飼育したところ、添加有りのマウスに形成された腫瘍においてGFPが発現誘導されることを確認した。これらの一連の実験により、レスキュー実験の基礎となるシステムが確立された。

This project aims to improve the molecular sequence, metabolic regulation and gene development of PDH enzyme in the field of tumor formation. In the past year, PDHE 1a and PDHE1b have been successfully established and the cell lines MCF7 and HCT116 have been successfully established. The phenotype of PDHE 1a and PDHE 1b has been confirmed. In addition, the expression of PDH is induced by the cell culture, cell culture and cell culture. PDHE1a, PDHE1b are all related to the concentration of different substances, and the concentration of different substances is determined by the concentration of different substances, toxicity, and intrinsic substances. The concentration of PDH is increased, the occurrence of PDH is normalized, and the occurrence of PDH is normalized In addition, the expression of GFP was induced by the addition of GFP to the induction system. The cells were transplanted, and the GFP was induced. This is the first time that we've seen this.

项目成果

Large-scale mapping of positional changes of hypoxia-responsive genes upon activation.

• DOI: 10.1091/mbc.e21-11-0593
• 发表时间: 2022-07-01
• 期刊: MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL
• 影响因子: 3.3
• 作者: Nakayama, Koh;Shachar, Sigal;Finn, Elizabeth H.;Sato, Hiroyuki;Hirakawa, Akihiro;Misteli, Tom
• 通讯作者: Misteli, Tom

旭川医科大学薬理学講座HP

旭川医科大学药理系 HP

がんの低酸素応答における早期と長期の遺伝子発現制御機構の解析

癌症缺氧反应的早期和长期基因表达控制机制分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Alcantara Mellissa C.;Suzuki Kentaro;Acebedo Alvin R.;Kajioka Daiki;Hirohata Satoshi;Kaisho Tsuneyasu;Hatano Yu;Yamagata Kazuo;Takahashi Satoru;Yamada Gen;中山 恒
• 通讯作者: 中山 恒

旭川医科大学 薬理学講座HP

旭川医科大学药理学课程 HP

Regulatory mechanism of gene expression during early and late phase of hypoxic response

缺氧反应早、晚期基因表达的调控机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林之乃;中山 恒;中山 恒
• 通讯作者: 中山 恒