Regulation of tumor growth mediated by pyruvate dehydrogenase PDH

点击翻译按钮获取中文摘要

本課題では、ピルビン酸脱水素酵素PDHのノックダウンにより腫瘍形成能が低下する分子機序を、代謝調節と遺伝子発現の両側面から明らかにすることをめざして、研究を進めた。前年度、樹立に成功したPDHE1a, PDHE1bのノックアウト細胞を、異なる乳がん細胞株(MCF7)および大腸がん細胞株(HCT116)についても作製し、それらの表現型を確認したところ、いずれも細胞増殖が抑制されていることが明らかになった。次に、これらの細胞に、ドキシサイクリン添加によりPDHの発現が誘導されるベクターを導入し、レスキュー実験を行った。PDHE1a, PDHE1bのそれぞれのレスキュー実験に関して、異なるドキシサイクリンの濃度条件を検討して、毒性を示さず、内在性遺伝子と同等の発現量が得られる濃度を決定した。この濃度でドキシサイクリンを添加したところ、各PDHの発現がレスキューされると共に、PDHを構成する他のサブユニットの発現も正常化することがウェスタンブロットにより明らかになった。さらに、同じドキシサイクリン誘導システムを用いて、ドキシサイクリン添加によりGFPの発現が誘導される乳がん細胞株を樹立した。この細胞をヌードマウスに移植し、ドキシサイクリン添加の有り無しで飼育したところ、添加有りのマウスに形成された腫瘍においてGFPが発現誘導されることを確認した。これらの一連の実験により、レスキュー実験の基礎となるシステムが確立された。