血管内皮細胞に特異的に発現するROBO4の発現制御機構の解析

血管内皮细胞特异性表达ROBO4的表达调控机制分析

• 批准号: 19890117
• 负责人: 岡田 欣晃
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19890117/
• 关键词: 血管内皮細胞; 遺伝子発現調節; Roundabout4; トランスジェニックマウス; 転写制御; Robo4; 分子生物学

これまで我々は血管内皮細胞に特異的に発現するROBO4遺伝子のプロモーター領域を解析し、転写因子GABPとSP1がROBO4遺伝子の転写開始点付近に結合し、転写を活性化することを、初代培養血管内皮細胞を用いた実験により明らにした。本年度は、まずROBO4プロモーターに存在するGABP結合サイトがin vivoにおいてもROBO4の転写制御に重要な役割を担っているのかを明らかにするため、トランスジェニックマウスの作成と解析を行った。まず、GABP結合サイトに変異もつ3kb ROBO4プロモーターにLacZ遺伝子とpolyAシグナルを連結させ、このトランスジーンターゲティングベクターに組み込んだ。得られたターゲティングベクターをマウスES細胞にエレクトロポレーション法を用いて導入し、相同組み換えによりトランスジーンをES細胞ゲノムに導入した。得られたES細胞をマウス胚盤胞にインジェクションし、キメラマウスを作成し、これをC57BL/6マウスと掛け合わせることにより、トランスジェニックマウスを作成した。得られたマウスの各臓器におけるLacZの発現をX-galを用いた染色により解析したところ、ROBO4プロモーターに変異を持つマウスは、変異を持たないプロモーターを持つマウスに比べ、LacZの発現が大きく減少していることを明らかにした。また、このLacZの発現の減少は、マウス胎児やガン中の血管においても確認された。以上の結果から、ROBO4プロモーター中のGABP結合サイトは、in vivoにおいてもROBO4の転写調節に必須であることが明らかとなった。現在、同様の実験を行い、SP1サイトに変異を持つプロモーターを持つES細胞株の樹立を行っている。

The ROBO4 gene expression domain was analyzed, the expression factor GABP and SP1 were combined with the ROBO4 gene expression domain near the expression start point, and the expression was activated. This year, ROBO4 was released in the presence of GABP, which was combined with ROBO4 in vivo. ROBO4 was released in the presence of GABP in the presence of GABP. GABP-binding agent: 3kb ROBO4-binding agent: LacZ-binding agent: polyA-binding agent: GABP-binding agent: GABP-binding agent: 3kb ROBO4-binding agent: LacZ-binding agent: polyA-binding agent: GABP-binding agent: 3kb ROBO4-binding agent: LacZ-binding agent: polyA-binding agent: 3kb ROBO4-binding agent: 3KB ROBO4-binding agent: 3KB ROBO4- The ES cells were introduced by the same method. C57BL/6 is the first cell in the world to be successfully developed. The occurrence of LacZ in the presence of X-gal in the presence of X-gal in the presence of X-gal The occurrence of lacZ is reduced, and the occurrence of lacZ is confirmed. The above results show that ROBO4 can be adjusted by GABP in vivo. Now, the same process is underway, SP1 service is different, and ES cell lines are established.

项目成果

血管内皮細胞に特異的に発現するRobo4遺伝子の発現制御領域の同定

血管内皮细胞特异表达的Robo4基因表达控制区的鉴定

• 发表时间: 2007
• 作者: Aoyama A;Chen F;Nakamura T;et. al.;西村 真樹;Yoshiaki Okada;舟橋 伸昭
• 通讯作者: 舟橋 伸昭

A three-kilobase fragment of the human Robo4 promoter directs cell type-specific expression in endothelium

• DOI: 10.1161/01.res.0000269779.10644.dc
• 发表时间: 2007-06-22
• 期刊: CIRCULATION RESEARCH
• 影响因子: 20.1
• 作者: Okada, Yoshiaki;Yano, Kiichiro;Aird, William C.
• 通讯作者: Aird, William C.