Efficient synthesis of glycoprotein by using mutant enzymes

利用突变酶高效合成糖蛋白

• 批准号: 19780252
• 负责人: FUJITA Kiyotaka
• 金额: $ 2.2万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19780252/
• 关键词: タンパク質; 糖鎖工学; エンドグリコシダーゼ; endo-β-N-acetylglucosaminidase; 糖転移; Endo-A; Endo-M; 糖タンパク質; 変異酵素; 糖ペプチド; ケミカルレスキュー; glycosynthase; neoglycoconjugate

本研究ではエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼが持つ糖タンパク質の糖鎖をすげ替える能力を変異導入により高めることを目的とし、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-M(Endo-M)のN173A変異酵素と酵素反応中間体であるオキサゾリン合成基質を組み合わせることにより、効率的な糖鎖転移方法の開発に成功した。また、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-A(Endo-A)のN171G変異酵素を用いることで、糖タンパク質への糖鎖転移活性を10倍高めることに成功した。本変異酵素を利用することにより、糖ペプチド及び糖タンパク質への糖鎖の導入効率を高めることができた。

In this study, we successfully developed an efficient and efficient method for the synthesis of substrates for the synthesis of N173A isoenzymes and enzyme reaction intermediates from endo-M (Endo-M). The activity of N171G isoenzyme in the enzyme was 10-fold higher than that of N171G isoenzyme in the enzyme. This enzyme has a high efficiency in the introduction of sugar into the body.

项目成果

Mutants of Mucor hiemalis Endo-β-N-acetylglucosaminidase Show Enhanced Transglycosylation and Glycosynthase like Activities.

冬毛霉内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体表现出增强的转糖基化和糖合酶样活性。

• 发表时间: 2007
• 作者: Umekawa;M.;Ashida;H.;Wang;L. -X.;Yamamoto;K.
• 通讯作者: K.

Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter endo-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant

通过化学拯救无活性突变体鉴定节杆菌内-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的催化酸碱残基

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Biochem. 142
• 作者: Fujita;K.;Sato;R.;Toma;K.;Kitahara;K.;Suganuma;T.;Yamamoto;K.;and Takegawa;K.
• 通讯作者: K.

部位特異的変異導入によるendo-β-N-acetylglucosaminidase A(Endo-A)の糖転移効率の向上

通过引入位点特异性突变提高内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 A (Endo-A) 的转糖基化效率

• 发表时间: 2008
• 作者: 藤田清貴;北原兼文;菅沼俊彦;山本憲二;竹川薫
• 通讯作者: 竹川薫

Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter end o-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant.

通过化学拯救无活性突变体来鉴定节杆菌末端邻-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的催化酸碱残基。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Biochem. 142
• 作者: Fujita;K.;Sato;R.;Toma;K.;Kitahara;K.;Suganuma;T.;Yamamoto;K.;and Takegawa;K.
• 通讯作者: K.

部位特異的変異導入によるendo-β-NacetylglucosaminidaseA(Endo-A)の糖転移効率の向上

通过引入位点特异性突变提高内切-β-N乙酰氨基葡萄糖苷酶 A (Endo-A) 的转糖基化效率

• 发表时间: 2008
• 作者: 藤田清貴;北原兼文;菅沼俊彦;山本憲二;竹川薫
• 通讯作者: 竹川薫