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真核生物の複製開始蛋白質、ORCの活性制御機構に関する研究

真核生物复制起始蛋白ORC活性调控机制研究

基本信息

批准号：
19790062
负责人：
牧瀬正樹
金额：
$ 2.42万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790062/
关键词：
サイクリン依存性キナーゼ複製開始蛋白質細胞周期 ORC リン酸化

项目摘要

細胞周期あたり一回だけDNA複製を開始させる制御機構において、サイクリン依存性キナーゼ(CDK)が主要な役割を果たしていると考えられているが、そのターゲット分子(CDKによりリン酸化される複製関連蛋白質)は充分に理解されていない。一方我々は、複製開始蛋白質のATP結合による活性制御という観点から、この複製開始制御機構を研究してきた。我々はまず大腸菌において、複製開始蛋白質DnaAにATPが結合することにより複製が開始されること、及びDnaAの内在性ATPaseが2回以上複製が開始されるのを抑制していることを見出した。次に我々は真核生物の複製開始蛋白質ORCのATP結合を解析し、Orc5p(ORCを構成するサブユニットの一つ)へのATP結合が、細胞内でのORCの安定化に寄与していることなどを見出した。一方我々は、Orc2p、及びOrc6pがCDKによりリン酸化されることから、このリン酸化の役割を検討し、Orc2p(特に188番目のセリン残基)がリン酸化されると、DNA複製を開始出来ないことを見出し、G1期におけるCDK活性の低下が複製開始反応の進行に、S/G2期におけるCDK活性の上昇が再複製の開始抑制に寄与していることを示唆した。さらに我々は、Orc2pがリン酸化されると、Orc5pにATPが結合できなくなることを生化学的に示すことに成功した。以上の結果は、CDKによるORCのリン酸化がOrc5pへのATP結合を制御することにより、細胞周期の進行を調節しているという全く新しい可能性を示しているので、今後研究を進める。

The regulatory mechanisms for initiation of DNA replication in the cell cycle are well understood, as are CDK (replication-related proteins), CDK (replication-dependent proteins), and CDK (replication-dependent proteins). A study on ATP binding mechanism of replication initiation protein I am a member of the DNA-bound enzyme family. Next, ATP binding analysis of ORC in eukaryotic replication initiation proteins, ATP binding of ORC 5p (ORC composition), and stabilization of ORC in cells were observed. Orc2p, Orc6p, and Orc2p were found to be responsible for CDK acidification, DNA replication initiation, CDK activity decrease in G1 phase, CDK activity increase in S/G2 phase, and replication initiation inhibition. Orc2p, Orc 5p, Orc 6 p, Orc 7 p, Orc 8 p, Orc 9 p, Orc 9, Orc 9, Orc 9, The above results indicate the possibility of complete regulation of cell cycle progression and future research.