アフリカトリパノソーマシアン耐性キノール酸化酵素の分子機構

非洲锥虫抗喹啉氧化酶的分子机制

• 批准号: 19790304
• 负责人: 坂元 君年
• 金额: $ 2.25万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790304/
• 关键词: トリパノソーマ; シアン耐性末端酸化酵素; アスコフラノン; キノール酸化酵素

本研究はアフリカトリパノソーマの寄生生活下でのエネルギー収支を調節しているシアン耐性末端酸化酵素(TAO)のキノール酸化反応の分子機構を解明することを目指し、大腸菌で発現させた組み換えTAOを用いて詳細な機能解析を行うものである。膜酵素であるTAOの可溶化後の安定化条件をもとにHis-Tagによるアフィニティ精製を行い、単一バンドのみが確認されるような精製TAOを安定に得ることが出来た。一段階の精製で十分な純度が得られたことから、数十mgスケールでの精製が比較的容易に出来るようになった。この精製TAOは酵素活性、阻害剤の感受性などにおいて可溶化前の膜から期待される性質を保持していた。さらに、この試料を用いICP-MSによる含有鉄定量を行った結果、酵素一分子に対して鉄が2原子含まれていることを初めて実験的に示すことになった。多くの金属含有酵素は可視光領域に吸収を持ち、すなわち色を持つが、これまで報告されている鉄二核錯体と同様に精製TAOは特に可視光領域の吸収を持たないことが確かめられた。次に精製TAOを用いた結晶化について検討した結果、まだ分解能は6A程度と低いものの、回折の得られる結晶化条件を見出した。これまでに結晶構造解析がなされている鉄二核錯体を持つタンパク質はすべて水溶性のタンパク質であり、膜タンパク質での結晶化の報告は未だ無い。この構造解析の結果はキノール酸化反応の機構を理解するのに有利であるだけでなく、膜結合性鉄二核錯体タンパク質の研究を牽引する研究になることが期待される。

In this study, the molecular mechanism of endurance terminal acidification enzyme (TAO), terminal acidifying enzyme (TAO), acidification and anti-enzyme acidification in parasitic life was used to determine the molecular mechanism of anti-terminal acidification. The molecular mechanism showed that the target of TAO could be analyzed by RT-PCR. After the membrane enzyme TAO was dissolved, the stabilizing conditions were determined, and the stability conditions were determined. After the membrane enzyme was dissolved, the membrane enzyme TAO was dissolved and stabilized. For a period of time, the precision is very high, and dozens of mg's are easier to come out than that. TAO enzyme activity, inhibition, sensitivity, solubility, membrane anticipation, sex retention. The ICP-MS is used to show that the enzyme molecule contains the results of the quantitative analysis, and that one molecule of enzyme contains the first step of the enzyme. Polychlorinated metal contains enzymes that can be used in the field of light to absorb light, to make sure that they can be absorbed in the field of light, and to make sure that they are sensitive in the field of light. The results of secondary TAO analysis show that the decomposition energy is 6A and the temperature is low. The crystallization conditions of the crystallization conditions are different from each other. The results of the analysis of the results show that the results of the analysis of the results of the analysis. The analysis results show that the anti-acidizing mechanism understands that it is beneficial to the membrane combination of binuclear compounds in the study of the acidification reaction system.

项目成果

Anaerobic NADH-fumarate reductase system is predominant in the respiratory chain of Echinococcus multilocularis, providing a novel target for the chemotherapy of alveolar echinococcosis

• DOI: 10.1128/aac.00378-07
• 发表时间: 2008-01-01
• 期刊: ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY
• 影响因子: 4.9
• 作者: Matsumoto, Jun;Sakamoto, Kimitoshi;Oku, Yuzaburo
• 通讯作者: Oku, Yuzaburo

Change of subunit composition of mitochondrial complex II (succinate-ubiquinone reductase/quinol-fumarate reductase) in Ascaris suum during the migration in the experimental host

• DOI: 10.1016/j.parint.2007.08.002
• 发表时间: 2008-03-01
• 期刊: PARASITOLOGY INTERNATIONAL
• 影响因子: 1.9
• 作者: Iwata, Fumiko;Shinjyo, Noniko;Kita, Kiyoshi
• 通讯作者: Kita, Kiyoshi