膜型エストロゲン受容体ＧＰＲ３０の新規調節機構の解明

膜型雌激素受体GPR30的新型调控机制的阐明

• 批准号: 15J12316
• 负责人: 城(渡辺) 愛理
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J12316/
• 关键词: エストロゲン受容体; 細胞内シグナル; エストロゲン; 膜型受容体; 細胞内局在; シグナル伝達

【研究目的】本研究では、膜型エストロゲン受容体GPR30の細胞内局在とシグナル伝達を調節する新規分子機構を解明し、性差医療の基盤を構築する。GPR30の細胞内局在がどのように調節されているのか、また、異なる局在が与える機能的な意義は何かを明らかにする。【研究計画と実施状況】1) GPR30発現細胞における細胞内局在の観察: 共焦点レーザー顕微鏡を用いた細胞免疫染色では小胞体オルガネラーカーとの共局在が認められた。2) GPR30を介した細胞内シグナル伝達: GPR30安定発現細胞を用い、細胞内カルシウム測定アッセイやTGFα切断実験などのGPCR機能アッセイを行い、エストラジオールやアルドステロン、GPR30選択的アゴニストG1、アンタゴニストG15による細胞内シグナル伝達への影響を解析した。3) GPR30調節タンパクの同定と機能解析：GPCRの局在とリガンド選択性を変えると報告されているreceptor-activity-modifying proteins (RAMPs)をGPR30と共発現させ、GPR30の細胞内局在とシグナル伝達への影響を解析した。RAMPsの共発現は、GPR30の細胞内局在とシグナル伝達へ影響を与えなかった。4) GPR30ノックアウトマウスの樹立：CRISPR/Cas9システムを用いてGPR30ノックアウトマウスを樹立した。5) GPR30発現臓器・発現細胞の同定：各臓器でのGPR30の発現量を定量PCRで解析した。GPR30の発現量の高かった臓器に関しては、in situ hybridization でGPR30が発現する細胞を同定した。6) GPR30ノックアウトマウスの表現型解析：無刺激・無負荷下で、血圧・体重・脈拍等の生理パラメーター測定と血液・尿検査、表現型解析を行った。

[Objective] This study aims to elucidate the molecular mechanisms for the regulation of intracellular expression in membrane receptor GPR30 and to construct a novel therapeutic matrix for sex difference. GPR30 is a cellular organ that regulates the function of the organ. [Research plan and implementation status] 1) GPR30 detection of cellular localization: confocal microscopy with cellular immunostaining of small cells 2)GPR30-mediated intracellular response: GPR30-induced stable cellular response, intracellular response, GPCR function, GPR30-mediated response, GPR30-mediated response. 3)GPR30 regulation of the same function analysis: GPCR in the region of the selection of the change in the report of receptor-activity-modifying proteins (RAMPs) in GPR30 co-generation, GPR30 in the cellular region of the impact of the analysis of the same function analysis RAMPs co-expression, GPR30 intracellular regulation in 4)GPR30 5)Identification of GPR30 receptor and receptor cells: quantitative PCR analysis of GPR30 receptor in each receptor. GPR30 is a high level of protein expression in cells that are stable in situ hybridization. 6)GPR30 phenotypic analysis: no stimulation, no load, blood pressure, weight, pulse and other physiological parameters, blood, urine, phenotypic analysis

项目成果

『糖尿病学2015』「10．高血糖や活性酸素により生成されたメチルグリオキサール(MGO)による慢性腎臓病」

《糖尿病2015》《10.高血糖和活性氧产生的甲基乙二醛（MGO）引起的慢性肾病》

• 发表时间: 2015
• 作者: 城愛理;稲城玲子;南学正臣
• 通讯作者: 南学正臣

メイラード反応の機構・制御・利用

美拉德反应的机理、控制与利用

• 发表时间: 2016
• 作者: 石本 遊;南学正臣;釘田雅則;長尾静子;清水章;Jing Zhou;稲城玲子;稲城玲子;Inagi R et al.;Tanaka S et al,;Reiko Inagi;Reiko Inagi;石本 遊, 稲城玲子;城愛理, 稲城玲子
• 通讯作者: 城愛理, 稲城玲子

『メイラード反応の機構・制御・利用』、「第5章 疾病とメイラード反応」

“美拉德反应的机理、控制和利用”、“第五章疾病和美拉德反应”

• 发表时间: 2016
• 作者: 城愛理;稲城玲子
• 通讯作者: 稲城玲子