Studies necessary to establish ideal HSC gene therapy for Wiskott Aldrich Syndrome

建立 Wiskott Aldrich 综合征理想 HSC 基因疗法所需的研究

• 批准号: 17H04225
• 负责人: 大津 真
• 金额: $ 10.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17H04225/
• 关键词: 遺伝子治療; ウイルスベクター; 遺伝子発現調節; 先天性免疫不全症; 免疫学; 生体分子; 人工多能性幹細胞; ゲノム編集

平成30年度までに、WASP完全欠損iPS（WAS-iPS）細胞について２患者由来の複数クローン、およびXLT-typeのWASP変異を有するiPS細胞についての複数クローンストックの整備を完了した。完全欠損型iPS細胞についてはCRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集を試み、患者特異的遺伝子変異配列の修復に成功しており、WASP変異患者における病態再現研究を可能にする基盤について構築を終了している。遺伝子治療モデル化については、WASP完全欠損iPS細胞にレンチウイルスベクターを用いて遺伝子付加を行い、WASP発現のモニタリングに供した。遺伝子導入株についてはシングルセルクローニングを行い、新たに開発したdigital droplet PCR法を用いた正確なベクターコピー数評価によって、ゲノム挿入されたプロウイルスコピー数の異なる治療細胞クローンのパネルを獲得した。ウイルスベクターには、２種類の異なるプロモーター（現在進行中の臨床遺伝子治療で使用されている1.6 Kb WASP 遺伝子由来人工プロモーターおよびEF1-alfa恒常的発現プロモーター）が搭載されたものを使用することで、本研究の目的達成に必要となる、治療遺伝子（タンパク）の発現レベル、発現調節様式を多様に再現する系の構築に成功した。さらに治療効果判定の評価系の至適化にも取り組み、巨核球/血小板系における血小板数低下に加え、マクロファージにおける食細胞機能異常の病態を再現する結果を得ている。また、WASPタンパクの発現評価に関しての精度向上のため、細胞内染色によるフローサイトメトリー法全般において、細胞固定化処理、細胞膜透過化処理について複数の方法を試みている。

In 2010, WAS-iPS cells were completely under-damaged. 2 Patients were born with multiple patients. There were differences between XLT-type and WASP-iPS cells. Complete Defective iPS Cell Design and Implementation of CRISPR/Cas9 System Design and Implementation of System Design and Implementation of Patient-Specific Gene Heterosis Design and Implementation of System Design. WASP completely fails to damage iPS cells, and WASP appears to be able to detect and detect the presence of the virus. A new method of digital droplet PCR was developed to detect and detect the presence of a gene in a cell line.ウイルスベクターには、2种类の异なるプロモーター (The current clinical gene therapy is currently in progress. The use of WASP gene is due to artificial replacement and EF1-alfa constant development.) The use of WASP gene is carried out successfully. The necessary conditions for achieving the objectives of this study are: the development of therapeutic gene, the development of regulatory methods, and the construction of multiple reproduction systems. The results of optimal selection of the evaluation system for the treatment outcome, increase of platelet count in the megakaryocyte/platelet system, and reproduction of pathological changes in phagocytic dysfunction were obtained. WASP, WASP

项目成果

免疫・代謝・血液疾患 原発性免疫不全症 造血幹細胞を標的とするSCID、WAS、CGDの遺伝子治療

免疫/代谢/血液疾病 原发性免疫缺陷病 针对造血干细胞的SCID、WAS、CGD基因治疗

• 发表时间: 2018
• 期刊: 医学のあゆみ
• 作者: 十川麻衣;松田直往;田川正朋;横井勇人;鈴木徹;鈴木 徹;塚﨑隆志，日比野光宏，小笠原義之，工藤徹一，山口和也，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;小笠原義之，日比野光宏，山口和也，工藤徹一，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;大津 真
• 通讯作者: 大津 真

Evaluation of the Utility of Induced Pluripotent Stem Cells as a Platform for Modeling Wiskott Aldrich Syndrome

诱导多能干细胞作为 Wiskott Aldrich 综合征建模平台的实用性评估

• 发表时间: 2017
• 作者: Honda-Ozaki F.;Lin H.T.;Lai C.Y.;Otsu M
• 通讯作者: Otsu M

疾患モデルへのiPS細胞の活用

利用 iPS 细胞建立疾病模型

• 发表时间: 2018
• 期刊: 血液フロンティア
• 作者: 十川麻衣;松田直往;田川正朋;横井勇人;鈴木徹;鈴木 徹;塚﨑隆志，日比野光宏，小笠原義之，工藤徹一，山口和也，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;小笠原義之，日比野光宏，山口和也，工藤徹一，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;大津 真;鈴木徹;大津 真
• 通讯作者: 大津 真

血液免疫難病における iPS 細胞を用いたモデル研究

iPS细胞治疗血液免疫疑难杂症的模型研究

• 发表时间: 2018
• 作者: 十川麻衣;松田直往;田川正朋;横井勇人;鈴木徹;鈴木 徹;塚﨑隆志，日比野光宏，小笠原義之，工藤徹一，山口和也，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;小笠原義之，日比野光宏，山口和也，工藤徹一，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;大津 真;鈴木徹;大津 真;大津 真
• 通讯作者: 大津 真

人工多能性幹（iPS）細胞を用いた血液免疫異常症における病態モデル研究

利用诱导多能干细胞（iPS）进行血液免疫疾病的病理模型研究

• 发表时间: 2018
• 作者: 十川麻衣;松田直往;田川正朋;横井勇人;鈴木徹;鈴木 徹;塚﨑隆志，日比野光宏，小笠原義之，工藤徹一，山口和也，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;小笠原義之，日比野光宏，山口和也，工藤徹一，奥岡晋一，小野博信，米原宏司，住田康隆，水野哲孝;鈴木 徹;大津 真;鈴木徹;大津 真;大津 真;大津 真
• 通讯作者: 大津 真